目的:本研究旨在传统抗酸染色法的基础上利用玻片离心沉淀仪对其进行改良,建立改良抗酸染色法,并评价其在涂阴肺结核患者支气管肺泡灌洗液中的应用价值。方法:(1)收集痰涂片阴性肺结核患者的支气管肺泡灌洗液标本,标本经4%Na OH按一定比例消化后,利用玻片离心沉淀仪收集其中的结核分枝杆菌,待玻片(实验前经多聚赖氨酸处理)干燥后,进行抗酸染色,建立改良抗酸染色法;(2)对收集到的灌洗液标本进行改良罗氏培养、直接涂片法、离心涂片法和改良抗酸染色法检测,对培养阳性患者的所有灌洗液标本用Gene Xpert?MTB/RIF系统进行检测,以罗氏培养作为金标准,通过比较不同方法间的差异,探讨改良抗酸染色法在涂阴肺结核患者支气管肺泡灌洗液中的诊断价值。结果:共纳入379例痰涂片阴性肺结核患者,其中32例被剔除,被剔除者中5例因诊断不明、15例因资料丢失、12例因标本培养污染而退出分析。最后347例患者中,74例患者改良罗氏培养阳性,基于74例患者进行统计分析,直接涂片法、离心涂片法和改良抗酸染色法敏感性分别为16.2%(95%CI:12.3,20.0)(n=12/74)、37.8%(95%CI:32.7,42.9)(n=28/74)、87.8%(95%CI:84.4,91.2)(n=65/74),改良抗酸染色法较直接涂片法和离心涂片法阳性率高,差异均有统计学意义(P<0.05)。直接涂片法、离心涂片法和改良抗酸染色法的特异性分别为100%(n=273/273)、100%(n=273/273)和99.6%(n=272/273)。Gene Xpert?MTB/RIF系统74例培养阳性患者中,阳性67例,阳性率90.5%。74例灌洗液培养阳性患者中共收集到106份标本,基于此106份标本进行统计分析,改良罗氏培养法、直接涂片法、离心涂片法、Gene Xpert?MTB/RIF系统和改良抗酸染色法阳性率分别为76.4%(81/106)、13.2%(14/106)、34%(48/106)、93.4%(99/106)和91.5%(97/106)。改良抗酸染色法与Gene Xpert?MTB/RIF系统的阳性率相近,但远高于直接涂片法和离心涂片法的阳性率,差异均有统计学意义(P<0.05)。对106份标本同时进行三种抗酸染色,每张染色玻片于油镜下观察300个视野,直接涂片法和离心涂片法的阳性视野数分别为34.4±54.0和38.2±36.8,而改良抗酸染色法的阳性视野数为69.0±67.8,远高于其它两种方法,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:(1)利用玻片离心沉淀仪成功建立了涂阴肺结核支气管肺泡灌洗液的改良抗酸染色法;(2)改良抗酸染色法明显提高了涂阴肺结核支气管肺泡灌洗液中结核分枝杆菌的检出率,对肺结核的诊断价值较大;(3)改良抗酸染色法简便、快速、经济、高效,值得临床推广应用。背景结核病是单一病原菌引起的感染性疾病中死亡率最高的疾病之一,是人类面临的重大公共卫生和社会问题。我国约有50%的人感染过结核分枝杆菌,结核性胸膜炎约占所有类型结核病5%,占肺结核病的10%~20%,其发病率大约为1.25%,据估算为160万人,青壮年是易感人群,39岁以下的患者占73%,其中约10%~30%的结核性胸膜炎患者有胸腔积液出现,是临床上第二大常见的肺外结核病。结核性胸膜炎如不能及时诊断和治疗,则可能造成胸膜增厚、粘连,甚至可引起肺功能下降而丧失劳动能力,因此及时诊治非常重要。胸腔积液是一种常见的临床问题,结核病和恶性肿瘤侵及胸膜是出现胸腔积液的两大主要原因,发生率分别为49.6%与29.6%。结核分枝杆菌抗酸染色和培养是诊断结核性胸膜炎的“金标准”,但结核性胸水离心涂片法阳性率极低,培养所需时间长,一般在4 w~8 w;PPD试验检测结果不易区分是否卡介苗接种、MTB潜伏感染及NTM感染;胸膜活检有创伤性,患者依从性差,诊断的敏感性和阳性率较低,操作耗时费力。结核性胸膜炎早期诊断困难,而诊断和治疗的延迟会导致死亡率的增加。因此,寻求对结核性胸膜炎快速、高效的诊断方法,在临床诊治工作中仍然是一个挑战。目前亟需研究新的检查方法以提高对结核性胸膜炎的诊断水平。近几年,应用玻片离心沉淀仪的改良抗酸染色技术大大提高了结核性脑膜炎的诊断效率,其原理为首先应用玻片离心沉淀仪浓缩脑脊液中的细胞和结核分枝杆菌,然后进行固定细胞和破坏细胞膜蛋白,再行抗酸染色。由于其浓缩原理较离心沉淀法好,避免了菌的浮力和转移损失的问题,加之收集的菌沉淀面积小,染色后可以同时观察细胞内外的结核分枝杆菌,所以阳性率较离心涂片法提高了将近80%。因此,我们推测玻片离心沉淀仪亦可应用于结核性胸水的诊断,有可能在结核性胸膜炎的早期诊断中发挥重要作用。本研究旨在建立结核性胸水的改良抗酸染色法,并进一步探讨其临床应用价值。目的:在传统抗酸染色的基础上利用玻片离心沉淀仪进行改良,建立胸水改良抗酸染色法,并评价其在结核性胸膜炎中的应用价值。方法:选取2014年6月1日至2015年8月31日于邯郸市传染病医院、河北省胸科医院收治的胸水患者,共纳入实验组结核性胸膜炎患者184例(胸水ADA>45U/L),对照组恶性胸水患者43例。建立改良抗酸染色法,对所有胸水分别进行离心涂片法、BACTEC 960培养法、Gene Xpert?MTB/RIF系统和改良抗酸染色法检测,将改良抗酸染色法的结果与其它方法结果进行统计学分析,综合评价其在结核性胸膜炎诊断中的应用价值。结果:共纳入184例结核性胸膜炎患者的胸水标本,5例被剔除的患者中其中1例是由于资料丢失,4例是由于培养污染。最后179例患者中,98例未经过抗结核治疗,81例已经开始抗结核治疗。纳入恶性胸水患者43例,其中3例由于培养污染被剔除。(1)未治疗组和治疗组结核分枝杆菌检出率比较:98例未治疗组,离心涂片法、改良抗酸染色法、BACTEC 960培养法和Gene Xpert?MTB/RIF系统阳性率分别为2.04%(2/98)、33.67%(33/98)、20.41%(20/98)和15.31%(15/98),改良抗酸染色法检测结核分枝杆菌的阳性率较其它三种方法阳性率高,差异有统计学意义(P<0.05)。81例已治疗组,离心涂片法、改良抗酸染色法、BACTEC960培养法和Gene Xpert?MTB/RIF系统阳性率分别为1.23%(1/81)、25.93%(21/81)、13.58%(11/81)和8.64%(7/81),改良抗酸染色法较其它三种方法阳性率高,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组和未治疗组中同种方法间结核分枝杆菌检出率相比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。(2)四种方法敏感性、特异性比较:以临床诊断为金标准,离心涂片法、改良抗酸染色法、BACTEC 960培养法和Gene Xpert?MTB/RIF系统检测的敏感性分别为1.68%(95%CI:0.00,3.38)、30.17%(95%CI:24.09,36.25)、17.32%(95%CI:12.31,22.33)和12.29%(95%CI:7.94,16.64),特异性分别为100%(40/40)、100%(40/40)、100%(40/40)和97.50%(39/40)。改良抗酸染色法较离心涂片法、BACTEC 960培养法和Gene Xpert?MTB/RIF系统敏感性高,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)改良抗酸染色法同份单次检测与重复检测检出率比较:实验组179例标本,第一次检测抗酸杆菌阳性为52例,第二次检测抗酸杆菌阳性为53例,第三次检测抗酸杆菌阳性为54例,阳性率分别为29.05%、29.61%和30.17%,三者之间比较无统计学意义(P>0.05)。(4)胸水中结核分枝杆菌含量检测结果:在Gene Xpert?MTB/RIF系统阳性的22份标本中,结核分枝杆菌含量极低(CT>28)20份,含量低(22<CT<28)2份。结论:(1)利用玻片离心沉淀仪成功建立了结核性胸腔积液的改良抗酸染色法;(2)结核性胸水中结核分枝杆菌浓度极低,改良抗酸染色法可明显提高结核性胸水的阳性率,比BACTEC 960培养法和Xpert MTB/RIF系统均高,对结核性胸膜炎的诊断价值较大;(3)改良抗酸染色法简便、快速、经济、高效,可作为早期诊断结核性胸膜炎的检查手段,值得临床推广应用。