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本试验旨在研究三种饲料添加剂[屎肠球菌(EF)、苹果果胶寡糖(APO)和三丁酸甘油酯(TRI)]对不同产蛋水平肉种鸡生产性能、肠道健康和卵巢功能的影响,为生产上提高肉种鸡繁殖性能提供理论指导和科学支撑。本试验选取512只48周龄AA肉种鸡,采用2×4双因素完全随机实验设计,2种产蛋水平肉种鸡[正常产蛋水平(AVE)79.53%±0.99,低产蛋水平(LOW)72.61%±1.66]和4种试验饲粮:包括基础饲粮(CON)、CON+6×10~8CFU/kg EF、CON+200mg/kg APO、CON+1000mg/kg TRI,试验共8个处理,每个处理8个重复,每个重复8只鸡。试验期为8周。结果表明:1)AVE组产蛋率以及合格种蛋率显著高于LOW组(P≤0.02),料蛋比以及蛋重显著低于LOW组(P<0.01);与CON相比,饲粮添加EF、APO和TRI均显著提高蛋重(P=0.01)。2)AVE组蛋壳厚度显著高于LOW组(P=0.05);与CON相比,饲粮添加APO显著提高蛋白高度和哈氏单位(P≤0.05);与饲粮添加APO和TRI相比,饲粮添加EF显著提高蛋壳厚度(P=0.01),且产蛋率和添加剂之间存在显著交互效应(P<0.01),在正常产蛋水平上添加EF提高蛋壳厚度的效果更优。3)AVE组血清免疫球蛋白A(IgA)含量显著高于LOW组(P<0.01);与CON和TRI相比,饲粮添加EF显著提高肉种鸡血清免疫球蛋白G(IgG)含量(P=0.02)。AVE组隐窝深度显著低于LOW组(P=0.05),且产蛋率和添加剂之间存在显著交互效应(P=0.04),在正常产蛋水平上肉种鸡饲粮中添加APO降低隐窝深度的效果更好;AVE组绒隐比显著高于LOW组(P<0.01);与CON相比,饲粮添加APO和TRI显著提高肉种鸡回肠黏膜支架蛋白(ZO-1)mRNA相对表达量(P=0.01)。与饲粮添加EF和APO相比,饲粮添加TRI显著提高盲肠食糜乙酸、丙酸和总短链脂肪酸(SCFAs)的含量(P≤0.02),与其他所有组相比,饲粮添加TRI显著提高盲肠食糜丁酸的含量(P=0.03);AVE组的微生物多样性(Shannon指数)、群落丰富度(Chao1指数和ACE指数)以及可观察到的物种数量(Observed species)均显著高于LOW组(P≤0.01);AA肉种鸡肠道微生物门水平上占优势的有拟杆菌门(Bacteroidetes)、厚壁菌门(Firmicutes)和变形菌门(Proteobacteria);AVE组拟杆菌门、厚壁菌门和Firmicutes/Bacteroides比值相对丰度显著低于LOW组(P≤0.03)。AVE组变形菌门、螺旋梯体门(Spirochaetes)、Kiritimatiellaeota的相对丰度显著高于LOW组(P≤0.04)。在属水平上占优势的有拟杆菌属(Bacteroides)、梭杆菌属(Fusobacterium)和普拉梭菌属(Faecalibacterium);AVE组普拉梭菌属显著高于LOW组(P=0.03),甲烷短杆菌属(Methanobrevibacter)显著低于LOW组(P<0.01)。由LefSe分析可知,AVE组变形菌门相对丰度显著高于LOW组,厚壁菌门、梭菌目(Clostridiales)、梭菌属(Clostridia)、毛螺菌科(lachnospiraceae)和拟杆菌目(Bacteroidales)的相对丰度显著低于LOW组[LDA SCORE(log10)>4];关联性分析表明,在门和属水平上,厚壁菌门、广古菌门(Euryarchaeota)、甲烷短杆菌属与产蛋率呈显著负相关(P<0.05),变形菌门、放线菌门(Actinobacteria)、溶杆菌属(Lysobacter)与产蛋率呈显著正相关(P<0.05)。广古菌门和甲烷短杆菌属与蛋重呈显著正相关(P<0.01),放线菌门和普拉梭菌属与蛋重呈显著负相关(P<0.01)。变形菌门、放线菌门和芽孢杆菌属(Bacillus)与腹脂率呈显著负相关(P<0.05)。4)与饲粮添加APO和TRI相比,饲粮添加EF显著提高了肉种鸡血清卵泡刺激素(FSH)的浓度(P=0.02)。AVE组肉种鸡卵巢抗缪勒管激素受体(AMHR)mRNA相对表达量显著低于LOW组(P<0.01);产蛋率和添加剂在AR mRNA相对表达量上存在显著交互效应(P=0.01),具体表现为饲粮添加EF和TRI在正常产蛋水平上显著提高肉种鸡卵巢AR mRNA相对表达量;与其他所有组相比,饲粮添加APO显著提高肉种鸡卵巢极低密度脂蛋白受体(VLDLR)mRNA相对表达量(P=0.03)。AVE组卵巢Caspase-9表达量显著低于LOW组(P=0.01)。与饲粮添加TRI相比,饲粮添加APO显著降低肉种鸡卵巢P53相对表达量(P=0.03)。产蛋率和添加剂在骨形成蛋白BMP15和转录因子GATA4 mRNA相对表达量上存在显著交互效应(P≤0.05),具体表现为饲粮添加TRI在正常产蛋水平肉种鸡上显著提高卵巢BMP15和GATA4 mRNA相对表达量。由此得出,产蛋率越高的肉种鸡,其合格种蛋率、蛋壳质量、肠道形态,免疫功能,盲肠微生物多样性和丰富度均优于产蛋水平相对低的肉种鸡;三种肠道调节物均能提高蛋重,饲粮添加6×10~8CFU/kg屎肠球菌能改善蛋壳质量,改善肉种鸡免疫功能和卵巢功能,饲粮添加200mg/kg苹果果胶寡糖能改善蛋品质,改善肠道物理屏障和卵巢功能,饲粮添加1000mg/kg三丁酸甘油酯能改善肠道物理屏障,提高盲肠食糜短链脂肪酸的含量,改善卵巢功能。且在不同产蛋水平肉种鸡饲粮中,其添加的效果不同,在正常产蛋水平肉种鸡饲粮中添加的效果更好。