论文部分内容阅读
目的:胶质细胞系源性神经营养因子(GDNF)能有效地保护中脑黑质多巴胺(DA)能神经细胞，为帕金森病(PD)的治疗带来了希望。GDNF发挥生物学作用要经膜受体介导，已知的GDNF受体有配体结合受体GDNF家族受体α1(GFRα1)和跨膜传递信息的信号转导受体RET，NCAM-140，Integrinβ1。已经观察到，在干扰了N-cadherin的表达后，GDNF对DA能神经细胞的保护作用减弱。本研究旨在进一步证实N-cadherin是否也能够作为另一个GDNF的跨膜信号受体。
方法:MN9D细胞分三组：GDNF组，在培养基中加入GDNF(50 ng/ml)；PBS组，在培养基中加入PBS(5 μl/ml)；空白对照组，不做处理。SD大鼠分三组：GDNF组，大鼠脑右侧黑质致密部定位注射GDNF(100 ng/4 μl)；PBS组，大鼠脑右侧黑质致密部定位注射PBS 4 μl；空白对照组，不做处理。用免疫共沉淀，免疫印迹等方法检测RET， NCAM-140，Integrinβ1，N-cadherin，GDNF，GFRα1的表达。
结果:同一组样品用anti-NCAM, anti-N-cadherin, anti-RET和anti-integrinβ1一抗的免疫共沉淀结果显示，未破坏脂筏时，GDNF和GDNF-GFRα1均能被检测到。破坏脂筏后，只在用anti-RET以及anti-N-cadherin一抗的样品中检测到GDNF，同时只在用anti-RET一抗的样品中检测到GDNF-GFRα1。破坏脂筏后，不同组样品用anti-RET或anti-N-cadherin一抗的免疫共沉淀结果显示， GDNF组GDNF的水平最高；而用anti-GDNF一抗的免疫共沉淀结果显示，GDNF组N-cadherin或RET的水平最高。免疫印迹的结果显示， RET和NCAM-140在脂筏上的表达GDNF组最高；integrinβ1在脂筏上的表达各组间差异没有统计学意义；N-cadherin在脂筏上未检测到。
结论:N-cadherin不需要通过GFRα1而是与GDNF直接相互作用来介导GDNF保护DA能神经细胞的作用，且此作用并非发生在脂筏这一平台上。