脓毒症患儿外周血MiRNA-466和GPR18mRNA的表达及其诊断价值

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目的探讨脓毒症患儿单个核细胞中miRNA-466和GPR 18 mRNA的表达,及两者之间的关系;探讨miRNA-466及GPR 18mRNA表达与SOFA评分的相关性及对脓毒症患儿的诊断价值。方法选择2017年10月—2019年6月于深圳市第四人民医院住院的脓毒症患儿90例,为脓毒症组,其中男55例、女35例,平均年龄2.20±0.23岁(年龄3月~5岁);选取同期体检的健康儿童60例作为对照组,其中男35例、女25例,平均年龄2.18±0.21岁(年龄3月~5岁)。收集脓毒症组患儿及对照组儿童临床病例资料,并分别采集外周静脉血5mL,经血清分离采集单个核细胞(PBMC),采用PCR法测定两组PBMC中miRNA-466和GPR 18 m RNA的表达,比较脓毒症组患儿与对照组儿童WBC计数﹑C反应蛋白(CRP)浓度﹑单个核细胞中miRNA-466及GPR 18 mRNA表达水平。采用Pearson相关分析脓毒症患儿外周血单个核细胞中miRNA-466和GPR 18mRNA与SOFA评分的相关性,ROC曲线分析CRP浓度﹑miRNA-466﹑GPR 18 m RNA及联合检测对儿童脓毒症的诊断价值。Luciferase报告基因实验验证miRNA-466和GPR 18基因间的表达关系。在PBMC细胞中分别上调和下调miRNA-466表达后,蛋白印迹测定GPR 18的表达变化。结果(1)脓毒症组患儿血中WBC计数显著高于健康对照组(11.05±3.86 vs.8.53±2.04,P<0.05),脓毒症组患儿血中CRP浓度显著高于健康对照组(38.43±11.52 vs.7.5±2.07,P<0.05)。(2)脓毒症组患儿外周血单个核细胞中miRNA-466表达水平显著高于对照组(1.35±0.52 vs.1.27±0.34 P<0.05),脓毒症患儿外周血单个核细胞中GPR 18 mRNA相对表达水平均高于对照组(1.53±0.54 vs.1.32±0.38P<0.05)。(3)Pearson相关示:脓毒症患儿外周血中WBC计数和SOFA评分无显著相关性(r=0.238,P=0.543),脓毒症患儿外周血中CRP浓度和SOFA评分显著正相关(r=0.472,P<0.01),脓毒症患儿外周血单个核细胞中miRNA-466和SOFA评分呈正相关(r=0.489,P<0.001),脓毒症患儿外周血单个核细胞中GPR 18mRNA和SOFA评分呈正相关(r=0.507,P<0.001)。(4)脓毒症患儿外周血单个核细胞中miRNA-466和GPR 18mRNA相对表达水平呈正相关(r=0.618,P<0.001)。(5)当截断值为33.7时,外周血中CRP浓度诊断脓毒症的ROCAUC为0.758,95%CI为0.669~0.817,敏感性为68.0%,特异性为71.3%;当截断值为1.32时,外周血单个核细胞中miRNA-466相对表达水平诊断脓毒症的ROCAUC为0.901,95%CI为0.813~0.969,敏感性为84.5%,特异性为87.9%;当截断值为1.38时,外周血单个核细胞中GPR 18 mRNA相对表达水平诊断脓毒症的ROCAUC为0.858,95%CI为0.761~0.917,敏感性为71.0%,特异性为92.3%;当联合检测单个核细胞中miRNA-466和GPR 18mRNA相对表达水平时,其诊断脓毒症的ROCAUC为0.947,95%CI为0.898~0.981,敏感性为90.9%,特异性为93.9%。(6)MicroRNA.org在线靶向基因预测结果表明,GPR 18 mRNA的3’-UTR存在一个miRNA-466靶向结合的位点。miRNA-466 mimic的表达能够显著降低相关luciferase活性(P<0.05)。在PBMC细胞中转染miRNA-466 mimic后,miRNA-466表达水平显著增加。转染miRNA-466 inhibitor后,miRNA-466表达水平显著降低。蛋白印迹示分别上调和下调miRNA-466表达后,细胞中GPR 18蛋白表达量分别增加和降低。结论脓毒症患儿的血CRP浓度、外周血单个核细胞中miRNA-466表达水平和GPR18 mRNA表达水平均与SOFA评分正相关;外周血单个核细胞中miRNA-466与GPR 18mRNA表达水平呈正相关。联合检测miRNA-466和GPR 18mRNA的表达水平有助于脓毒症患儿的诊断,miRNA-466与GPR 18存在靶向调控关系。
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