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研究背景七氟醚以其独特的优势目前已较广泛地应用于临床麻醉的多个领域,而且因其不增加患儿的躁动和非适应性的行为改变,特别适用于小儿麻醉。近年来对七氟醚代谢酶及其在体内多种代谢途径的研究,使得人们对于七氟醚在体内的代谢机制有了更深入的了解,七氟醚在体内的代谢主要是由肝脏微粒体内的CYP2E1来催化完成的,所以CYP2E1表达量以及活性的任何改变,都将影响到七氟醚的体内代谢,据此推测可用CYP2E1的表达量变化来检测七氟醚的体内代谢转化程度,使定位七氟醚的肝外代谢器官成为可能。其它一些吸入麻醉剂除主要在肝脏中进行代谢外,还可在肾脏和肺脏等肝外组织中进行代谢,CYP2E1肝外器官组织的表达提示七氟醚也存在肝外代谢,这对于机体在肝移植无肝期减低七氟醚的可能损害尤为重要。应用动物模型研究各种吸入麻醉药的体内代谢,为探索人体内CYP2E1对七氟醚的代谢机制提供了一种有效途径,对进一步研究肝脏移植的无肝阶段,吸入式麻醉剂七氟醚的药代动力学具有十分重要的意义。目的本实验以大鼠为动物模型,小肠、肺脏和肾脏组织为研究对象,解剖分离并阻断肝门,模拟临床肝移植手术中无肝期阶段,通过免疫组化、RT-PCR和Westrn-blot三种方法观察CYP2E1酶的基因、蛋白的表达和变化,为探讨七氟醚在无肝状态下的代谢途径及作用机制提供依据。材料和方法实验分为两部分:1、肝门阻断后用免疫组织化学法检测七氟醚代谢相关CYP2E1酶在肝外小肠、肺脏和肾脏组织的表达。将SD大鼠随机分为三组,对照组(A)、无肝期30分钟(B)和无肝期60分钟(C),n=8,各组均吸入七氟醚麻醉,B和C组通过阻断肝门模拟肝移植无肝期,相应时间终点截取各组大鼠小肠、肺脏和肾脏组织,应用免疫组织化学法检测七氟醚代谢相关药酶CYP2E1在其中的表达。2、制作肝外组织匀浆, RT-PCR和Western blot法分别检测肝门阻断后七氟醚代谢相关CYP2E1酶在小肠、肺脏和肾脏组织的基因mRNA和蛋白质的表达变化。将SD大鼠随机分为三组,对照组(A)、无肝期30分钟(B)和无肝期60分钟(C),n=6,各组均吸入七氟醚麻醉,B和C组通过阻断肝门模拟肝移植无肝期,相应时间终点截取各组大鼠小肠、肺脏和肾脏组织,制作组织匀浆,应用RT-PCR、Western Blot检测七氟醚代谢相关药酶CYP2E1在其中的表达。结果1、CYP2E1免疫组织化学法检测,肝外肺脏组织中CYP2E1阳性表达在B组和C组显著多于A组(P<0.05),B组和C组相比无显著差异(P>0.05),图片显示CYP2E1在肺脏组织的多种细胞中表达,在肾脏和小肠的单一细胞中表达。2、RT-PCR、Western Blot检测显示肝外肺脏组织中CYP2E1的表达在B组和C组显著强于A组(P<0.05),B组和C组相比无显著差异(P>0.05)。结论大鼠无肝状态下,CYP2E1在肝外器官组织中表达增多,可能促进七氟醚的肝外代谢,其中肺脏可能是最主要的肝外代谢器官。