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本文以亚硒酸化β-乳球蛋白为研究对象,测定其对人非小细胞肺癌增殖的抑制作用和诱导细胞凋亡作用。通过MTT法、Hoechst33342/PI双染、流式细胞术、荧光定量PCR和Western blot等方法检测亚硒酸化β-乳球蛋白对A549细胞的凋亡作用。首先,MTT实验结果表明,200 μg/mL的亚硒酸化β-乳球蛋白能显著抑制A549细胞的增殖,且当培养时间延长至72 h后,最大抑制率可达到90%,但对人肾上皮细胞HEK293的生长无毒害作用;倒置显微镜和Hoechst 33342/PI双染均观察到200μg/mL的亚硒酸化β-乳球蛋白能使A549细胞出现典型的凋亡现象,如细胞体积缩小、核质分离及出现凋亡小体等;AnnexinV-FITC/PI双染结果显示,经2000μg/mL的亚硒酸化β-乳球蛋白共培养48 h、72 h后,细胞凋亡率可分别增至37.07%,42.13%;此外,流式细胞术检测结果表明亚硒酸化β-乳球蛋白可使A549细胞周期阻滞在G0/Gi期,且进一步实验检测到亚硒酸化β-乳球蛋白诱导的A549细胞的凋亡现象与细胞线粒体跨膜电位的降低及体内活性氧的蓄积有关;另外,激光扫描共聚焦显微镜检测到亚硒酸化β-乳球蛋白能导致A549细胞线粒体膜通道孔的开放。其次,根据A549细胞线粒体跨膜电位的降低以及线粒体膜通道孔的开放等现象,进一步研究了亚硒酸化β-乳球蛋白诱导A549细胞凋亡的信号通道。荧光定量PCR检测结果显示,经亚硒酸化β-乳球蛋白处理过的细胞,可显著上调BaxmRNA的含量,下调Bcl-2mRNA的表达,并导致cytochrome c由线粒体渗透至细胞质内,从而活化Caspase-3,导致细胞发生凋亡;此外,Western blot结果也显示出相似的实验结果,即亚硒酸化β-乳球蛋白能够上调Bax蛋白的表达、下调Bcl-2蛋白的含量,促使cytochrome c的释放、并活化Caspase-3蛋白,促使A549细胞发生凋亡。综上所述,体外实验表明,亚硒酸化β-乳球蛋白能显著抑制人非小细胞肺癌A549细胞的增殖并通过线粒体途径诱导细胞发生凋亡,是一种很有潜力的抗肺癌活性的物质。