禽流感不仅危害养殖业,造成大量经济损失,还严重威胁着人类生命健康,接种疫苗是目前最有效的预防手段。禽流感疫苗长期使用鸡胚生产,存在诸多弊端。动物细胞培养方式因其优势显著,逐渐在国际上得到认可。其中无血清悬浮培养易于放大、实现高密度培养,且成本较低、稳定性高,是流感疫苗生产的主要方向。目前我国市场上还没有用无血清悬浮培养细胞生产H9亚型禽流感疫苗的产品,亟需对该工艺过程进行研究,建立高病毒产量、适合工业化生产的工艺。本文从批培养和离心换液两种极端的工艺入手,分析二者产毒差异大的主要原因是营养物质、代谢副产物和环境三方面条件的不同。离心工艺滴度高,但实际生产中不易实现,本文以两种工艺的差异为指导,改进批培养工艺,提高产毒量。对于批培养工艺缺乏营养的问题,在批培养工艺基础上添加各种营养物质探究能否提升产毒量。结果表明,单独添加葡萄糖或谷氨酰胺不能提高病毒产量;流加浓缩培养基,病毒滴度可达到2^10.3HAU/25μl,但工艺复杂;稀释流加原培养基,可达到2^9.0HAU/25μl,工艺简洁,但还可以通过调节工艺参数进一步提高滴度。对于批培养工艺代谢副产物积累的问题,在离心换液保证营养充足的条件下添加代谢副产物乳酸或铵,探究代谢副产物对病毒生产的影响。结果表明接毒时40 mM以内的乳酸物质或8 mM以内的铵,其物质本身都不影响产出病毒的最大滴度。对于批培养和离心工艺产毒期环境不同的问题,优化产毒期pH和温度。结果发现pH≤6.0会导致HA滴度下降,产毒期pH控制在7.0±0.2为宜,且适当降低温度（30℃-35℃）有利于产毒。综合对上述条件的探究,本文建立了稀释流加降温工艺。经反应器验证,HA滴度可达到2^10.6±0.2 HAU/25μl,单细胞产毒量为（16060±786）virions/cell,超过离心工艺水平。该工艺简洁高效,为流感疫苗工业化生产提供了基础数据支持。