中药注射剂是以传统中医药理论为指导,采用现代先进的科学技术与方法,从天然药物的单方和复方中提取有效物质研制而成,可供注入人体内使用的灭菌制剂。中药注射剂不仅保留了传统中医药的治疗优势,而且具备了西药注射剂起效快等特点,其在临床上具有其独特的优势,具作用快、剂量小而准确的特点,可局部病灶注射或穴位注射,其综合疗效优于西药制剂。本论文主要开展以斑蝥与蟾酥为原料的中药抗癌注射液DLS的制备工艺研究工作,共分为四章,其中一章文献研究,三章实验研究。主要研究内容如下:第一章文献研究对中药注射剂的研究现状及斑蝥与蟾酥抗肿瘤的作用机制进行了系统的归纳与总结,分析了斑蝥和蟾酥组成具有抗肿瘤作用的复方注射剂的可行性。第二章斑蝥与蟾酥提取及精制工艺研究以文献及本课题组的前期研究结果显示,斑蝥中斑蝥素和斑蝥酸、蟾酥中蟾毒配基类为它们的有效成分,两者中的水溶性蛋白皆是刺激性成分,故研究中以斑蝥与蟾酥提取液中刺激性成分残留、有效成分保留及活性为评价指标,优化斑蝥与蟾酥的提取和精制工艺参数。建立了 UPLC-TQ/MS法与UPLC-UV法分别对斑蝥中斑蝥素和斑蝥酸、蟾酥中蟾毒它灵、日蟾毒它灵、蟾毒灵、沙蟾毒精、华蟾酥毒基和脂蟾毒配基进定量分析的方法;建立了 Nano LC-Orbitrap法分析上述两种药材提取液中多肽类成分的分析方法,用于不同参数各提取与精制工艺评价。以水及乙醇为提取溶媒,采用L9（34）正交试验,通过比较2种溶媒各工艺参数下有效成分及水溶性蛋白的提取效率,确定斑蝥的最佳提取工艺。由于斑蝥中有效成分与刺激性杂质的主要区别为分子量,故选用超滤法去杂是一个较好的方法,比较有效成分保留、蛋白成分降低及大鼠足肿胀实验综合评价工艺参数,最终得出斑蝥的最佳提取和精制工艺为:取斑蝥粉末适量,加入15倍的纯水回流提取3次,每次0.5 h,合并滤液后离心取上清液,得斑蝥提取液,采用中空纤维超滤膜,截留出小于3K部分的溶液,即得。蟾酥的抗肿瘤活性成分主要为脂溶性的蟾毒配基类成分,根据溶解性为有效成分与刺激性杂质的主要性质差异,比较了以下三种工艺:①先用水溶解杂质再乙醇提取;②先乙醇提取再超滤除杂;③前两种工艺串联法。比较有效成分保留、蛋白成分降低及大鼠足肿胀实验综合评价工艺及其参数,最终优选出蟾酥的最佳提取和精制工艺为:取蟾酥粉末适量,精密称定,料液比1:20（g/mL）加水,超声30 min,温度0℃,离心去除上清液,沉淀加乙醇浸泡24 h,滤过,滤液浓缩至干,水复溶,即得。对采用选定的提取、精制工艺制备样品及未经过精制工艺的样品进行了以下的比较研究:①斑蝥和蟾酥提取液经精制后有效成分保留率均为82%以上,表明提取液经选定的工艺精制后,可较好的保留斑蝥与蟾酥中的有效成分;②采用MTT试验,比较了斑蝥和蟾酥精制前后提取液的抗肿瘤活性变化,结果表明精制前后斑蝥和蟾酥提取液对HepG2、A549癌细胞的抑制率无显著性差异,表明提取液按选定的工艺精制后,可有效降低其刺激性,同时较好地保留了斑蝥和蟾酥的抗肿瘤活性;③斑蝥和蟾酥提取液经精制后水溶性蛋白损失率分别为34%和51%,表明选定的精制工艺可显著降低提取液中的蛋白类成分的含量;④通过兔耳血管刺激性实验比较两者提取液精制前后的刺激性,结果显示精制后斑蝥和蟾酥提取液的刺激性显著降低,表明上述斑蝥与蟾酥的提取和精制工艺可有效降低斑蝥和蟾酥提取液中刺激性成分,表明该提取和精制工艺可用于斑蝥和蟾酥复方注射剂的开发研究。第三章提高DLS稳定性研究研究发现斑蝥提取液中斑蝥素与斑蝥酸在不同pH值环境中可相互转化,pH值在2～6之间,主要以斑蝥素形式存在,较高的pH环境,则主要以斑蝥酸形式存在,为保证注射液中斑蝥素的稳定性,有必要使注射液的pH值在产品的有效期内保持恒值,根据注射液pH值要求,将其控制在4～6之间较为适宜。为此通过比较不同pH缓冲体系（枸橼酸-枸橼酸钠、甲酸-甲酸铵、盐酸-氯化铵）中斑蝥素及蟾毒配基类成分的稳定性以优选制剂处方。另外通过冻干粉针处方优选及制剂稳定性试验,探讨将其制成冻干粉针的可行性。冻干粉针研究中,考察赋形剂种类与比例,最终选择甘露醇作为赋形剂,且甘露醇与注射液的体积比为1:1时,产品成形性较好。并对注射液及其冻干粉的稳定性进行考察,为后期注射液的制剂处方筛选与质控研究奠定基础。第四章注射液主要成分药动学研究开展了斑蝥提取液、蟾酥提取液及配伍后各有效成分在大鼠体内药动学研究。以UPLC-TQ/MS法测定大鼠体内斑蝥素、斑蝥酸、蟾毒它灵、日蟾毒它灵、蟾毒灵、沙蟾毒精、华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的血药浓度。方法学考察结果表明,方法精密度、稳定性和准确度均符合要求。配伍后斑蝥与蟾酥提取液中各有效成分中除日蟾毒它灵的AUC0-t有所升高,其余7种有效成分的Cmax、Tmax、T1/2、AUC0-t等药代动力学参数较配伍前无显著差异,因此联合给药可提高日蟾毒它灵的生物利用度,对其他7种活性成分的药代动力学参数没有明显影响,这一研究可为斑蝥与蟾酥联合给药的研究与临床应用提供参考依据。