基于树枝状聚合物PAMAM的糖蛋白人工抗体材料的制备及其在糖蛋白质组学研究中的应用

来源 :大连医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:muteng12
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目的:糖蛋白是已知的一组最重要和最复杂的翻译后修饰的蛋白。许多癌症的临床标志物和治疗靶标都是糖蛋白。然而,糖特异性抗体的分离及不稳定性仍然是分析方法和诊断检测的重大挑战。在本研究中,Nanopoly-BAV作为一种多功能化可溶性纳米聚合物,首次设计并合成出,并且用于膜上糖基化分析有高效及高选择性的优点。这种高效和高选择性纳米聚合物在通过清楚地鉴别来自蛋白表达变化的糖基化信号,以此监测细胞信号通路方面具有巨大的潜力,并且具有优异的稳定性和可重复使用性,为监测细胞信号通路和发现新的信号通路提供了一种强有力的工具。方法:FTIR分析用于检验树枝状聚合物分子上是否成功键合上官能团。通过X射线光电子光谱(XPS)进一步表征Nanopoly-BAV聚合物的化学组成。通过透射电镜(NS-TEM)观察Nanopoly-BAV的形态结构。基于Nanopoly-BAV的糖蛋白检测实验流程与标准的Western blot方法十分类似。将蛋白质混合物经过SDS-PAGE或直接点样方法转移到PVDF膜上,该带有蛋白的膜经封闭后,与Nanopoly-BAV孵育而不是常规一抗,并且使用亲和素-HRP代替常规二抗。最后,添加化学发光HRP底物用于糖蛋白成像。结果:由FTIR结果可知Nanopoly-BAV表面成功连上硼酸基团和生物素基团。通过X射线光电子光谱(XPS)进一步表征了材料的化学组成。硼的特征信号在约190e V位置的出现,表明了PAMAM 4.0上成功接上-BOOH官能团。同时Nanopoly-BAV的S2p谱也证明了PAMAM 4.0上连有生物素基团。NS-TEM观察Nanopoly-BAV的形态结构发现,代表性TEM图像显示Nanopoly-BAV在分散介质中为单分散,为分布均匀的球状形态,平均直径为15 nm。Nanopoly-BAV对糖蛋白有高度的特异性和选择性且灵敏度达到了飞摩尔水平,对于非糖蛋白抗干扰能力高达100,000倍。结论:总之,我们设计的一种新型多功能化可溶性纳米聚合物可成功用于糖蛋白的识别,并且具有特异性好、灵敏度高、稳定性好和易于获得等优点。由于Nanopoly-BAV分子表面的多个硼酸和糖蛋白的多个糖链之间的共价结合,显示出对糖蛋白的强亲合力。因此,基于蛋白的糖基化性质和程度,Nanopoly-BAV可以用作一种特异性抗体或染色方法,用于检测0.1 ng或更少量糖蛋白。整个实验过程简捷易见,极易于在任何生命科学实验室执行。基于Nanopoly-BAV的方法对于如下三方面具有非常重要的意义:发现新的糖蛋白,概要内源糖基化水平的变化而无位点微环境干扰,克服商品化抗体昂贵和不可获得的缺点。
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