本实验针对鸡传染性贫血病的诊断工作建立了ELISA和IFA两种血清学诊断方法，以及病原DNA的PCR诊断方法，并将三种诊断方法进行系统比较研究。同时还进行了1日龄SPF雏鸡感染CAV后血清内SOD、GSH-P_x、MDA与血液中相关微量元素的研究。另外还开展了4周龄SPF雏鸡人工接种CAV后外周血液中CD3~+、CD4~+、CD8~+、γδT细胞亚群变化的研究，以及感染鸡胸腺、脾脏、法氏囊内CD3~+、CD4~+、CD8~+、γδT细胞亚群和B细胞的动态变化，全面深入地阐述SPF雏鸡人工感染鸡贫血病病毒后的免疫发病机理。研究结果如下： 1.建立了ELISA和IFA两种血清学诊断方法以及病原DNA的PCR诊断方法，用三种诊断方法分别检测1日龄人工接种CAV后7天、14天、21天、28天感染鸡，结果ELISA的检出率分别为0/10、5/10、8/10、10/10，IFA的检出率分别为0/10、3/10、5/10、10/10，而PCR方法的检出率分别为10/10、10/10、10/10、10/10。结果表明，在感染早期阶段PCR的检出率明显高于ELISA、IFA，在感染后4周时三种检测方法都适用于对鸡传染性贫血病进行诊断。 2.对1日龄SPF雏鸡感染CAV后7天、14天、21天、28天血清内SOD、GSH-P_x、MDA研究发现，感染鸡SOD、GSH-P_x明显低于对照鸡，MDA的含量显著增加，表明在CAV致病过程中机体内抗氧化系统受到损害，机体清除自由基能力下降。 3.对1日龄SPF雏鸡感染CAV后血液中一些与机体抗氧化功能密切相关的微量元素检测发现，感染鸡血液内Se和全血中Cu、Zn、Mn、Fe均有显著下降。研究结果提示感染CAV雏鸡机体的内环境发生变化，同时Se、Zn、Mn含量的降低也与SOD活性下降呈正相关。 4.CAV感染4周龄SPF雏鸡后，7～21天用流式细胞记数仪检测到外周血液中CD3~+细胞明显低于对照鸡，其中7，21天有显著性差异（P＜O.05），14天有极显著性差异（P＜0.01），28天以后没有统计学差异（P＞0.05）。 CAV感染4周龄SPF雏鸡后，感染组的CD4~+T细胞明显低于对照鸡。其中7～14天有极显著性差异（P＜0.01）；21天时有显著性差异（P＜0.05）；28天以后没有统计学差异（P＞0.05）。 王秀荣 摘 要2000年5月 CAV感染4周龄SPF雏鸡后，感染组的CDS”T细胞明显低于对照鸡，其中7，28无有显著性差异（P＜0刀5）；1个刀天时有极显著性差异（P＜0刀5）。 CAV感染 4周龄 SPF雏鸡后，14－21天感染组的 Y 6 T细胞明显低于对照鸡，其中14天有显著性差异（P＜0刀5）：ZI 天时有极显著性差异（P＜0刀1）；其它检测时间感染组与对照组之间差异不显著。 上述研究结果表明，CAV对感染鸡的T细胞有损伤作用，这种损伤作用是针对多种T细胞表面抗原的，而不是仅仅破坏或抑制某一种T细胞表面抗原的表达。 5．CAV感染4周龄SPF雏鸡后，感染鸡胸腺内CD3”、CD4”、CDS”、Y盯细胞均有明显减少，CD31细胞在不同时期内大约减少50％左右；CD4“、CDS“T细胞受损较为严重，尤其是皮质区CD4“或CDS＋T细胞几乎完全枯竭，仅残存网状结构：同时Y6T细胞也明显减少。结果表明，＊＊V主要损害幼稚型T细胞亚群，对成熟T的损害作用较幼稚型T细胞弱，这一结果符合己有的研究结论。 6．CAV感染 4周龄 SPF雏鸡后，感染鸡脾脏内 CD3＋、CD4”、CDS”、Y 6 T细胞有明显减少，感染后7天就可以检测到CD31细胞在不同时期内大约减少50％左右：携带不同表面抗原的T细胞明显少于对照组织切片，感染后14天这种变化最为明显，ZI，28天时略有好转，但仍少于对照组织。结果表明，CAV不仅可以破坏细胞中枢免疫器官内携带不同表面抗原的T细胞，对外周免疫器官内的T细胞亚类同样具有感染破坏力。 7．CAV感染4周龄SPF雏鸡后，用鼠抗鸡IgG抗体标记脾脏和法氏囊内的IgG抗体生成细胞，再用兔抗鼠IgG－Hny结合，最后采用DAB显色，间接检测到CAV感染后 14天脾脏内 IgG抗体生成细胞明显低于对照鸡，统计学差异显著p＜0刀5），ZI天以后有恢复趋势，统计学差异不显著。 CAV感染 4周龄 SPF雏鸡后，法氏囊内 IgG抗体生成细胞在感染后 14～xl天明显低于对照鸡，统计学差异显著或极显著（P＜0刀5，P＜0刀1）。 结果表明，CAV不仅引起T细胞数量降低，使感染鸡细胞免疫受到抑制，同时也引起B细胞数量减少，对体液免疫机能产生负作用。