星状病毒属于星状病毒科,是一种无囊膜、单股正链RNA病毒,在人和动物体内广泛存在,它是引起婴儿和幼龄动物腹泻的主要病原之一。家禽感染后不仅引发腹泻和生长不良,还会带来严重致死性的肝炎和肾病。自2017年以来,我国山东、河南、安徽和江苏等省份的部分雏鹅陆续暴发一种以痛风为主要特征的传染性疾病。该病主要侵害两周龄以内的雏鹅,引起全身器官尿酸盐沉积,死亡率高达50%以上,对养鹅业造成了严重的经济损失。本研究首先对疑似感染新型鹅星状病毒的病料进行处理,然后利用鸡胚肝细胞分离鉴定此病毒,通过RT-PCR检测、测序分析证实为新型鹅星状病毒,进而开展动物回归试验以确定其致病性。RT-PCR检测结果显示,扩增出与目的片段大小一致的条带,约为759 bp;病毒接种鸡胚肝细胞,出现细胞皱缩、变圆为特征的病变;动物回归试验结果表明,接毒雏鹅出现了与自然感染病例较为一致的临床症状及剖检变化,主要表现为全身脏器、关节腔有大量的尿酸盐沉积,在攻毒后的第3 d、5 d、7 d、9 d、11 d、13 d进行采样,每组随机剖检5只,收集肾脏、肝脏、脾脏、心脏等组织器官利用荧光定量PCR测定病毒含量,结果显示在攻毒第7 d肾脏的病毒载量最高。利用实验室已纯化的ORF 2蛋白免疫14日龄的健康雏鹅,于三免后的第7 d静脉采血,对制备的血清进行无菌检验,同时检测常见病毒的抗体,测定血清抗体效价,并做抗体特异性检测,结果显示该阳性血清无菌,不含其他病毒抗体,细胞中和试验表明制备的血清能够与新型鹅星状病毒发生特异性反应。另外,我们将实验室已保存的杂交瘤细胞进行复苏,制备腹水,经检测,腹水效价可高达1:204800,WB和IFA鉴定结果显示,所制备腹水能够与ORF 2蛋白发生特异性反应,具有免疫活性。本研究将ORF 2纯化蛋白作为包被抗原,所制备的腹水为竞争抗体,建立新型鹅星状病毒抗体的竞争ELISA检测方法,并优化确定最佳反应条件。利用所建立的竞争ELISA方法检测40份GAst V阴性血清,根据统计学方法计算出阳性临界值为48%。上述检测方法与AIV、GPV、ARV、DEV病毒抗体无交叉反应,证明该方法的特异性较好;板内变异系数为5.82-6.75%,板间变异系数为3.97-7.70%,表明该方法具有比较好的重复性。最后用67份血清分别进行竞争ELISA和细胞中和试验,结果显示符合率为80%。综上所述,本研究分离到一株新型鹅星状病毒,并建立了其抗体竞争ELISA检测方法,为养禽生产中新型鹅星状病毒的诊断和血清流行病学调查以及免疫监测提供了技术支撑。