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目的
基于TLR4/TRAF6/NF-κB通路，探讨慢性阻塞性肺疾病(Chronic Obstructive Pulmonary Disease，COPD)稳定期大鼠肺气虚证的相关机制及中药(爱罗咳喘宁方)的干预作用。
方法
将60只SD大鼠(SPF级，雄性，7~8周龄)随机分为6组，即：正常组，模型组，爱罗咳喘宁方高、中、低剂量组(40、20、10 g?kg-1?d-1)，消咳喘糖浆组(3.5 ml?kg-1?d-1)。以脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)气管内滴注结合香烟烟熏(每天2次)的方法，制备COPD稳定期肺气虚证大鼠模型，观测并记录大鼠一般情况、肺组织病理和肺功能，评价模型是否制备成功。成功造模后，对各给药组进行灌胃给药2周。灌胃结束，检测各组大鼠肺功能，遂进行取材和指标检测：①酶联免疫吸附测定法(Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay ， ELISA)对大鼠血清、支气管肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluid ， BALF )和肺组织匀浆液中肿瘤坏死因子-α(Tumornecrosisfactoralpha，TNF-α)、白细胞介素-12(Interleukin12，IL-12)的含量进行测定。②实时荧光定量PCR(quantitative Real-Time Polymerase Chain Reaction，qRT-PCR)法检测肺组织中Toll样受体4(Toll-like receptor 4， TLR4)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(Tumor necrosis factor receptor-associated factor 6 ， TRAF6)、核转录因子κB(NucleartranscriptionfactorκB，NF-κB)p65、β2肾上腺素能受体(β2adrenergicreceptor，β2AR)的基因水平。③蛋白质印迹法(Western blot)检测肺组织中TLR4、TRAF6、NF-κBp65、β2AR的蛋白表达。④免疫组织化学法(Immunohistochemistry，IHC)检测并观察肺组织中TLR4、TRAF6、NF-κBp65、β2AR阳性表达。
结果
与正常组比较，模型组大鼠肺功能(呼气流量峰值、潮气量)明显下降(P＜0.01)；血清、BALF和肺组织匀浆液中TNF-α、IL-12含量均明显升高(P＜0.01)；肺组织中TLR4、TRAF6、NF-κBp65的基因水平及蛋白表达均明显升高(P＜0.01)，β2AR基因水平及蛋白表达明显降低(P＜0.01)。与模型组比较，各给药组的呼气流量峰值、潮气量均不同程度上升(P＜0.01)；血清、BALF、肺组织匀浆液中TNF-α、IL-12含量均不同程度下降(P＜0.01)；肺组织中TLR4、TRAF6、NF-κBp65的基因水平及蛋白表达均不同程度降低(P＜0.01或P＜0.05)，β2AR的基因水平及蛋白表达均不同程度上升(P＜0.01)。与消咳喘糖浆组比较，爱罗咳喘宁方中剂量组的呼气流量峰值、潮气量升高显著(P＜0.01)；血清、BALF和肺组织匀浆液中TNF-α、IL-12含量降低显著(P＜0.01)；TLR4、TRAF6、NF-κBp65的基因水平及蛋白表达降低显著(P＜0.01或P＜0.05)，β2AR基因水平及蛋白表达升高显著(P＜0.01)。
肺组织病理改变：正常组大鼠肺组织呈嫩红色，且表面光滑。模型组则见肺组织表面不平整，呈暗红色。镜下可观察到正常组肺组织内细支气管及肺泡结构完整，管腔内无大量分泌物，无黏液腺增生，肺组织内无炎性细胞聚集；模型组肺组织细支气管内纤毛存在部分脱落，与分泌物黏聚成团，阻塞于管腔内，炎性细胞聚集，黏液腺增生，肺泡结构破坏，形成肺大泡，且存在肺间质增厚；与模型组比较，各给药组肺组织内细支气管内分泌物不同程度减少，炎性细胞聚集程度减轻，其中，爱罗咳喘宁方中剂量组症状改善优于爱罗咳喘宁方高、低剂量组，及消咳喘糖浆组。
结论
1.慢性阻塞性肺疾病稳定期大鼠肺气虚证的发病与TLR4、TRAF6、NF-κBp65表达增强，β2AR表达下降，TNF-α、IL-12含量升高有关。
2.爱罗咳喘宁方通过抑制TLR4、TRAF6、NF-κBp65表达，增强β2AR的表达，降低TNF-α，IL-12的含量，对抗炎症反应，调节免疫功能，改善气道重塑，减轻COPD稳定期大鼠肺气虚证表现，阻止病程进展。
基于TLR4/TRAF6/NF-κB通路，探讨慢性阻塞性肺疾病(Chronic Obstructive Pulmonary Disease，COPD)稳定期大鼠肺气虚证的相关机制及中药(爱罗咳喘宁方)的干预作用。
方法
将60只SD大鼠(SPF级，雄性，7~8周龄)随机分为6组，即：正常组，模型组，爱罗咳喘宁方高、中、低剂量组(40、20、10 g?kg-1?d-1)，消咳喘糖浆组(3.5 ml?kg-1?d-1)。以脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)气管内滴注结合香烟烟熏(每天2次)的方法，制备COPD稳定期肺气虚证大鼠模型，观测并记录大鼠一般情况、肺组织病理和肺功能，评价模型是否制备成功。成功造模后，对各给药组进行灌胃给药2周。灌胃结束，检测各组大鼠肺功能，遂进行取材和指标检测：①酶联免疫吸附测定法(Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay ， ELISA)对大鼠血清、支气管肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluid ， BALF )和肺组织匀浆液中肿瘤坏死因子-α(Tumornecrosisfactoralpha，TNF-α)、白细胞介素-12(Interleukin12，IL-12)的含量进行测定。②实时荧光定量PCR(quantitative Real-Time Polymerase Chain Reaction，qRT-PCR)法检测肺组织中Toll样受体4(Toll-like receptor 4， TLR4)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(Tumor necrosis factor receptor-associated factor 6 ， TRAF6)、核转录因子κB(NucleartranscriptionfactorκB，NF-κB)p65、β2肾上腺素能受体(β2adrenergicreceptor，β2AR)的基因水平。③蛋白质印迹法(Western blot)检测肺组织中TLR4、TRAF6、NF-κBp65、β2AR的蛋白表达。④免疫组织化学法(Immunohistochemistry，IHC)检测并观察肺组织中TLR4、TRAF6、NF-κBp65、β2AR阳性表达。
结果
与正常组比较，模型组大鼠肺功能(呼气流量峰值、潮气量)明显下降(P＜0.01)；血清、BALF和肺组织匀浆液中TNF-α、IL-12含量均明显升高(P＜0.01)；肺组织中TLR4、TRAF6、NF-κBp65的基因水平及蛋白表达均明显升高(P＜0.01)，β2AR基因水平及蛋白表达明显降低(P＜0.01)。与模型组比较，各给药组的呼气流量峰值、潮气量均不同程度上升(P＜0.01)；血清、BALF、肺组织匀浆液中TNF-α、IL-12含量均不同程度下降(P＜0.01)；肺组织中TLR4、TRAF6、NF-κBp65的基因水平及蛋白表达均不同程度降低(P＜0.01或P＜0.05)，β2AR的基因水平及蛋白表达均不同程度上升(P＜0.01)。与消咳喘糖浆组比较，爱罗咳喘宁方中剂量组的呼气流量峰值、潮气量升高显著(P＜0.01)；血清、BALF和肺组织匀浆液中TNF-α、IL-12含量降低显著(P＜0.01)；TLR4、TRAF6、NF-κBp65的基因水平及蛋白表达降低显著(P＜0.01或P＜0.05)，β2AR基因水平及蛋白表达升高显著(P＜0.01)。
肺组织病理改变：正常组大鼠肺组织呈嫩红色，且表面光滑。模型组则见肺组织表面不平整，呈暗红色。镜下可观察到正常组肺组织内细支气管及肺泡结构完整，管腔内无大量分泌物，无黏液腺增生，肺组织内无炎性细胞聚集；模型组肺组织细支气管内纤毛存在部分脱落，与分泌物黏聚成团，阻塞于管腔内，炎性细胞聚集，黏液腺增生，肺泡结构破坏，形成肺大泡，且存在肺间质增厚；与模型组比较，各给药组肺组织内细支气管内分泌物不同程度减少，炎性细胞聚集程度减轻，其中，爱罗咳喘宁方中剂量组症状改善优于爱罗咳喘宁方高、低剂量组，及消咳喘糖浆组。
结论
1.慢性阻塞性肺疾病稳定期大鼠肺气虚证的发病与TLR4、TRAF6、NF-κBp65表达增强，β2AR表达下降，TNF-α、IL-12含量升高有关。
2.爱罗咳喘宁方通过抑制TLR4、TRAF6、NF-κBp65表达，增强β2AR的表达，降低TNF-α，IL-12的含量，对抗炎症反应，调节免疫功能，改善气道重塑，减轻COPD稳定期大鼠肺气虚证表现，阻止病程进展。