研究背景增生性瘢痕是人体皮肤受到一定深度的损伤后,自身组织修复过度的一种表现，常由各种创伤、烧伤、手术等引起。成纤维细胞大量增殖和细胞外基质大量合成及过度沉积是增生性瘢痕的病理特征。研究发现转化生长因子β1(Transforming growth factorβ1，TGF-β1)在这一病理过程中发挥着重要作用。Smad通路是TGF-β1向胞内传递信号的主要通路，该信号通路受到多个环节的反馈调节。核转录共抑因子SnoN (Ski-related novelgene N)是Ski原癌基因家族的成员之一，它最重要的作用就是通过与Smad蛋白相互作用，从而来负调控TGF-β1通路。因此，SnoN的表达水平在很大程度上能够影响TGF-β1的生物学效应，而SnoN蛋白水平主要是通过泛素-蛋白酶体途径降解调节的。泛素-蛋白酶体途径(Ubiquitin Proteasome Pathway，UPP)是调节真核细胞内蛋白质降解的一条重要途径，它在细胞信号转导、细胞周期调控、遗传信息的复制和表达等生命现象中起重要作用。UPP主要是由泛素、泛素化相关酶和26S蛋白水解酶复合体3部分组成。近年来研究显示，在肝、肾、肺等纤维化疾病中，伴随病情进展SnoN蛋白的水平逐渐下降（泛素化降解），使得其对TGF-β1/Smad通路的负反馈调节减弱，从而促进了纤维化疾病的发生、发展。而在增生性瘢痕中关于SnoN的表达及其泛素化降解，国内外未见文献报道。目的探讨增生性瘢痕成纤维细胞中SnoN的表达及其泛素化降解方法（1）收集临床上烧伤后增生性瘢痕标本及同一个体整形后剩余正常皮肤，分别体外分离培养增生性瘢痕和正常皮肤成纤维细胞，采用免疫荧光检测两组细胞中SnoN蛋白的定位；（2）收集增生性瘢痕和正常皮肤成纤维细胞，Western Blot检测两组细胞中SnoN的蛋白水平，RT-PCR检测其mRNA表达；（3）在分离培养的两组成纤维细胞中加入浓度为10ng/ml的外源性TGF-β1，并于加后30min、1h、2h、6h收集细胞，采用Western Blot检测增生性瘢痕成纤维细胞与正常皮肤成纤维细胞中SnoN蛋白水平的变化，RT-PCR检测其mRNA水平的变化；（4）收集增生性瘢痕和正常皮肤成纤维细胞的全细胞裂解液，分别加入泛素化反应混合物于37℃孵育2h、4h、6h、12h， Western Blot检测两组细胞中SnoN蛋白的体外降解变化；（5）在分离培养的增生性瘢痕成纤维细胞中，加入浓度为5μΜ MG132于37℃共孵育12h，观察其对SnoN体外降解的抑制作用。结果（1）在增生性瘢痕和正常皮肤成纤维细胞中，SnoN蛋白在细胞核与细胞浆内均有表达，但主要定位于细胞浆内；（2）在增生性瘢痕成纤维细胞中，SnoN蛋白水平明显低于正常皮肤成纤维细胞，但mRNA水平无明显差异；（3）在TGF-β1刺激下，正常皮肤成纤维细胞中SnoN蛋白和mRNA表达水平均呈时间依赖性增高；而在增生性瘢痕成纤维细胞中，SnoN的mRNA表达呈时间依赖性增加，但其蛋白水平却呈时间依赖性减少；（4）增生性瘢痕成纤维细胞中SnoN蛋白的体外降解明显增强，而正常皮肤成纤维细胞中SnoN蛋白的体外降解无明显变化；（5）蛋白酶体抑制剂MG132可以阻断增生性瘢痕成纤维细胞中SnoN的体外降解。结论1、增生性瘢痕成纤维细胞中SnoN蛋白表达减少，导致其对TGF-β1信号通路的抑制作用减弱，从而放大了TGF-β1信号，可能参与了增生性瘢痕的形成；2、增生性瘢痕成纤维细胞中，SnoN蛋白的表达减少可能与其泛素化降解有关。