【摘 要】
：
本研究从肝癌基因治疗存在的有效性与安全性问题出发,采用HSV-tk与IL-12双基因联合的方法以提高肝癌基因治疗的有效性,而利用肝癌的特异性启动子启动联合基因在肝癌细胞内特
论文部分内容阅读
本研究从肝癌基因治疗存在的有效性与安全性问题出发,采用HSV-tk与IL-12双基因联合的方法以提高肝癌基因治疗的有效性,而利用肝癌的特异性启动子启动联合基因在肝癌细胞内特异性表达,增强肝癌基因治疗的安全性。为此本研究利用基因重组技术构建联合基因靶向特异性治疗肝癌的载体,并在体外细胞水平验证该载体杀伤肝癌细胞的有效性与特异性。本论文取得了如下学术进展:1应用PCR技术成功从人外周血基因组中调取人甲胎蛋白基因启动子(pAFP)、增强子(eAFP)。并将克隆的pAFP与增强子eAFP先后连接入真核表达载体,构建成由pAFP与eAFP启动基因表达的载体。利用报告基因β-半乳糖甘酶基因(β-gal)验证了该启动子具有启动基因在肝癌细胞中表达的特异性。2成功应用连接肽将人IL-12基因的两个亚单位基因拼接为单链基因。应用核糖体进位位点(IRES)将IL-12基因与单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(HSV-tk)拼接在一起,构建成HSV-tk与IL-12融合的真核基因表达载体。通过体外实验研究结果表明,两个基因可以在肝癌细胞内同时表达,并具有相应的抗肿瘤与激活免疫细胞的功能。说明这两个基因在统一启动子控制下可实现共同表达,使免疫增强基因IL-12与肿瘤自杀基因HSV-tk同步共表达,增强两条途径杀伤肿瘤的协同作用。3成功构建了由人甲胎蛋白基因启动子(pAFP)、增强子(eAFP)控制下的IL-12与HSV-tk联合基因表达载体,将该载体体外转染肝癌细胞以及非肝癌细胞,实验结果表明IL-12与HSV-tk基因在肝癌细胞内有特异性的表达,表达HSV-tk基因的肝癌细胞对GCV有敏感性,并可产生杀伤肿瘤的旁观者效应。IL-12可以促进体外淋巴细胞的增殖,以及IFN-γ的分泌。这些研究结果说明克隆的人甲胎蛋白基因启动子(pAFP)、增强子(eAFP)可特异性启动IL-12与HSV-tk在分泌AFP肝癌细胞内特异性表达,并具有杀伤肝癌细胞功能。本研究在一个载体上实现了联合基因的共同表达以及基因表达的肝癌靶向性,为进一步利用该载体进行肝癌的基因治疗奠定了理论与实验基础。
其他文献
1以防冻为主要目的的涂白剂用生石灰10kg、硫磺粉1kg、食盐0．2kg，加水30～40kg搅拌均匀调成糊状，于11月下旬到12月下旬对树干进行涂白。
泛素结合酶UbcH10 (Ubiquitin-conjugating enzymes UbcH10)又称周期蛋白选择性泛素载体蛋白E2-C,属于泛素结合酶E2家族的成员。在细胞周期调控过程中,UbcH10通过与具有E3连
<正>基于智慧物流、供应链网络设计的运输管理模块帮助国美解决了总部与分公司的分级管理,有效整合资源,实现跨区销售,提供端到端全程物流服务,大幅提升了物流管理水平
水泥稳定碎石基层,作为众多路基基层中的一种,在我市最近几年的公路工程建设中并不少见,本人通过参与施工管理,并结合在其它一些建设项目的应用情况,将重点介绍一下该种基层
水泥稳定碎石基层,作为众多路基基层中的一种,在我市最近几年的公路工程建设中并不少见,本人通过参与施工管理,并结合在其它一些建设项目的应用情况,将重点介绍一下该种基层
目的:观察甘草酸二铵对继发性胆汁淤积性大鼠肝纤维化形成中肝细胞向肌成纤维细胞转分化(EMT)的影响。方法:75只SD雄性大鼠采用随机分为假手术对照组(Sham,n=15)及胆汁淤积性
以河北省推广种植的20个玉米杂交种为试材,苗期采用沙培培养方法,以15%PEG-6000溶液对幼苗进行模拟水分胁迫,研究干旱胁迫下苗期SOD、POD、APX等7个生理生化指标的变化趋势及
澳大利亚扁桃栽培始于1837年，从西班牙引进扁桃品种‘Jordan’，之后又陆续从美国加州引进‘Nonpa—reil’，‘IXI’，‘Ne Plus Ultra’，‘Davey’等品种。在2c世纪90年代，澳大利亚扁桃产量呈现稳定增长的趋势.但是相对于世界扁桃而言，目前的产量仍较小，2000年前后，年产扁桃仁8600 t左右，主要限制因子是水资源有效利用的问题。澳大利亚扁桃生产区通常年降雨量仅25
回 回 产卜爹仇贱回——回 日E回。”。回祖 一回“。回干 肉果幻中 N_。NH lP7-ewwe--一”＄ MN。W;- __._——————》 砧叫]们羽 制作:陈恬’＃陈川个美食
Back to yield
目的运用原子力显微镜(AFM)观察人体不同类型肿瘤细胞与相应的正常细胞的细胞膜表面结构的变化,从中寻找规律并分析它们的共同特点及诊断价值。方法选取上皮性肿瘤(肝细胞性