大豆BT基因抗虫转化体的鉴定与评价

来源 :吉林农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yuhui269
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
在我国的主要粮食作物中,大豆含有多种的氨基酸和维生素,营养丰富且种植不难,已成为了人们不可或缺的重要食材。但近些年来,大豆虫害却给我国的大豆产量造成了不小的影响,通常的化学防治技术不仅增加成本,而且也造成了环境污染,也威胁到大豆的食品安全。而通过植物基因工程技术来选育产量高的抗虫大豆品种逐渐成为了一条有效的解决途径。在目前的基因工程技术中,BT(Bacillus thuringiensis,BT)基因被首先应用于作物育种中,并在抗虫效果上取得了良好表现。通过研究转基因技术发现,当作物中被导入BT基因后可使该作物充分表现出良好的抗虫性。本试验就是将抗虫基因Cry1Iem的180株株系、抗虫基因Cry8-like的120株株系以及抗虫基因Cry1AB13-2的90株株系作为研究对象。通过使用常规PCR检测分析、Southern杂交、荧光定量PCR技术对其转抗虫基因的株系分别进行分子鉴定,再对这三种转抗虫基因的阳性植株株系进行室内外接虫,选育农艺性状从而鉴定不同的抗虫基因所具备的抗虫功能。分别将已转化的株系与受体品种“吉农28”大豆植株进行抗虫能力的比较,从而验证出该三种抗虫基因所具备的抗虫性高低,为后续的种质改良与品种选育提供参考。本试验获得的主要结果如下:1、将转抗虫基因Cry1Iem大豆的T6代株系、Cry8-like大豆的T5代株系以及转抗虫基因Cry1AB13-2的大豆T4代株系作为试验材料,分别选取其中10个株系各个进行常规PCR检测,结果在转抗虫基因Cry1Iem大豆的T6代株系、Cry8-like大豆的T5代株系、Cry1AB13-2大豆的T4代株系当中检测到了目的基因Cry1Iem、Cry8-like、Cry1AB13-2、Bar、启动子Ca MV35S、Nos的目标片段。结果表明,在受体“吉农28”大豆植株当中所有的目的基因都分别被成功导入,并都以单拷贝形式完成整合,并得到了稳定遗传。2、以Bar基因作为探针,在转抗虫基因Cry1Iem大豆的T6代株系、Cry8-like大豆的T5代株系、转Cry1AB13-2大豆的T4代株系中各选取5个株系进行Southern杂交。结果表明,目的基因都分别以单拷贝的形式整合到了“吉农28”大豆基因组当中。3、荧光定量PCR检测结果表明:在转Cry1Iem抗虫基因的6株植株中,叶片与茎秆的目的基因相对表达量分别为:5.46、5.89、6.55、4.61、4.22、3.97;1.16、1.22、1.50、0.88、0.78、1.02。选取5株转Cry8-like抗虫基因在植株的根部相对表达量为:6.28、2.43、10.52、2.45、1.37。选取5株转Cry1AB13-2抗虫基因植株的根、茎、叶三个部位的相对表达量分别为:1.25、1.79、1.98、2.53、1.55;3.04、3.78、2.82、3.97、2.45;6.11、6.67、5.89、7.12、5.32。而在非转化的受体“吉农28”大豆植株当中未检测到荧光信号,不同株系同一部位的表达量不同,同样同一株系不同部位的表达量也不相同。4、室外抗食心虫鉴定结果表明:“吉农28”大豆受体植株的虫食率为6.97%,转Cry1Iem基因株系的虫食率为3.41%,比未转化植株低3.56%,抗性级别达到抗性水平;转Cry8-like基因株系的虫食率为3.14%,比未转化植株低3.83%,抗性级别达到抗性水平;转Cry1AB13-2基因株系的虫食率为3.11%,比未转化植株低3.86%,抗性级别也达到抗性水平。同时转抗虫基因Cry1Iem的株系与其他两个转抗虫基因的株系在其他性状上无明显差异,但转抗虫基因Cry1AB13-2株系在室外抗虫性效果上的表现与其他两个转抗虫基因株系相比更为优异些。5、室内抗黏虫鉴定结果表明:在72小时之内,取食转抗虫基因Cry1Iem、Cry8-like、Cry1AB13-2的株系叶片的黏虫体重均明显低于取食受体材料“吉农28”大豆植株叶片的黏虫体重。受体“吉农28”大豆品种感虫指数达到了72.5397±1.2993,属于感虫级别,而转Cry1Iem基因植株、转Cry8-like基因植株和转Cry1AB13-2基因植株的抗虫级别均表现为MR-中抗(40≤IF<50)以上。这表明分别转抗虫基因Cry1Iem、Cry8-like、Cry1AB13-2的大豆株系均具有显著的抗虫性,而转Cry1AB13-2抗虫基因的大豆植株在抗虫效果上的表现更为优异,其中转化株系Cry1AB13-2-22的感虫指数达到了15.3703±0.6677。
其他文献
随着全国大部分城市放开对烟花爆竹的禁令,引发了学界对习惯权利的重新关注。习惯权利最先在马克思的《关于林木盗窃法的辩论》中提出,更多的是对贫民阶级生存权利的同情,而随着
胎儿宫内窘迫是指以胎儿胎盘系统的呼吸循环功能不全为主要表现的综合征,多由于胎儿缺氧引起,它可诱发新生儿窒息,甚至死亡,新生儿窒息是胎儿宫内窘迫的延续,造成胎儿宫内窘迫的原
锆合金具有热中子吸收截面小,良好的力学性能和耐腐蚀性能,广泛应用于核反应堆中燃料元件的包壳,它的耐水侧腐蚀性能是影响燃料元件使用寿命的主要因素。合金化是提高锆合金耐腐蚀性能的重要方式,但锆合金中合金元素众多,相互之间作用错综复杂,很难清晰合金元素间以及合金元素与水化学条件的作用机制。本工作以高纯锆为基材,配制Zr-x Cu-y Cr((x,y)=(0.3,0.2)、(0.3,0.5)、(0.3,1
社区护理是将公共卫生学及护理学的知识与技能结合,借助有组织的社会力量以社区为基础,人群为服务对象,对个人、家庭及社区提供服务.如健康教育、健康指导、家庭护理、康复指
计算2006-2009年间物理学领域和医学或生理学领域21名诺贝尔获奖者的h指数、g指数和hg指数,分别按h指数、g指数和hg指数进行排序,考察hg指数的排序是否较h指数和g指数排序更
随着课程改革的深入,在课改过程中需要对教师信念的形成与发展进行探析,进而深入分析教师行为,来促进教师信念的理论建设,提高教师教学行为的有效性,加速教师专业化发展,促进
由桥面板,纵肋和横梁组成的正交异性钢桥面板,由于其特有的特性,引起了许多桥梁工程师,非常轻。正交异性钢甲板的金属结构特别适用于重量是设计的关键参数,如大型和非常大的