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本论文分为临床观察、实验研究两个部分临床观察 目的：回顾性调查分析益气化瘀清热方治疗儿童难治性肾病综合征临床疗效。方法：采用回顾性纵向对比研究分析2013年7月至2014年7月之间在河南中医学院第一附属医院及郑州市儿童医院治疗的60例难治性肾病综合征患儿,观察其在治疗前及治疗后2周、4周、8周、12周、24周及36周的24小时尿蛋白定量(24h-UTP)、总胆固醇(CHOL)、血浆白蛋白(ALB)、活化部分凝血酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、纤维蛋白原(FIB)、疾病复发率及血常规、肝肾功相关安全性指标的变化,通过统计学分析了解两组之间的差异。结果：治疗组总有效率86.7%,对照组总有效率70.0%,两组间有统计学意义(P<0.05)。并且治疗组复发率比对照组低(P<0.05)。36周治疗结束后,治疗组的尿蛋白定量和总胆固醇下降程度、血清白蛋白升高程度及凝血改善情况均优于对照组(P<0.05)。结论：益气化瘀清热方可改善患儿24小时蛋白定量、血浆白蛋白、血脂及高凝血情况,减少儿童难治性肾病综合征的复发率,提高临床总有效率,临床观察未见不良反应。实验研究 目的：观察益气化瘀清热方及其拆方对小鼠足细胞表达瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(TRPC6)、podocalyxin的表达影响,探讨这些中药对嘌呤霉素氨基核苷(PAN)损伤足细胞的作用机理。方法：应用PAN刺激体外培养的小鼠足细胞,形成PAN足细胞损伤模型,造模成功后的足细胞随机分为益气组、化瘀组、清热组、复方组、对照组、雷公藤组、模型组、空白组,采用RT-PCR和Western Blot法检测各组血清对小鼠足细胞表达TRPC6、podocalyxin mRNA及蛋白表达的影响。结果：1、RT-PCR结果示,TRPC6、podocalyxin在空白组与模型组相比差异有统计学意义(P<0.05)。①含药血清作用24小时后,雷公藤组和清热组在提高podocalyxin表达方面作用最强,而其余各组的作用低于对照组；雷公藤组降低TRPC6表达最强,其次为清热组、化瘀组和复方组,益气组作用最弱。②含药血清作用48小时后,各含药血清均能促使podocalyxin表达升高,其中复方组和雷公藤组表现最强,其次为化瘀组,益气组和清热组作用最弱；各含药血清均能降低TRPC6表达,且各组间无明显差异(P>0.05)。2、Western Blot结果示TRPC6、podocalyxin蛋白表达在空白组与模型组相比差异有统计学意义(P<0.05)。①含药血清作用24小时后,清热组对升高podocalyxin蛋白表达作用最强,优于复方组、清热组、化瘀组(P<0.05)；各含药血清均能降低TRPC6蛋白表达,其中益气组和化瘀组作用最强,优于复方组和清热组(P<0.05)。②各含药血清作用48小时后,各组含药血清均能促使podocalyxin蛋白表达增高,其中复方组表达作用最强,其次为化瘀组,而益气组和清热组作用不明显；各含药血清均能降低TRPC6蛋白高表达,复方组作用最强,优于益气组、清热组,而化瘀组作用最弱。结论：1、益气化瘀清热方及其拆方均能升高podocalyxin mRNA和蛋白的表达, 并降低TRPC6mRNA和蛋白的表达。2、当PAN刺激24小时后,清热组在升高podocalyxin mRNA及蛋白表达方面作用最强。当PAN刺激48小时后,复方组在升高podocalyxin mRNA表达及蛋白表现最强,其次为化瘀组,益气组和清热组作用最弱。其中清热组和复方组在不同时间点升高mRNA水平与雷公藤组作用相当。3、当PAN刺激24小时后,雷公藤组降低TRPC6 mRNA高表达最强,其次为清热组、化瘀组和复方组。而在蛋白表达方面,益气组和化瘀组作用最强,复方组和清热组作用较弱。PAN刺激48小时后,各含药血清均能降低TRPC6 mRNA及蛋白高表达,其中复方组在降低蛋白方面作用最强。