抗菌肽CMIV是由中国科学家从家蚕中分离纯化得到的一类带正电荷的抗菌小肽，它由35个氨基酸组成，不含甲硫氨酸和半胱氨酸。它除了具有广谱抗菌功能以外，还具有抑制一些肿瘤细胞生长的作用。本实验室在抗菌肽CMIV基因的3-末端加了一个天冬酰胺密码子，构建成杀菌肽-X基因，采用了与TNFb基因融合表达的方法获得在大肠杆菌中的高效表达，表达产物为包涵体。融合蛋白经溴化氰裂解后得到有活性的杀菌肽-X。 药效学预实验证明，杀菌肽-X对小鼠S180肉瘤和Lewis肺癌的抑瘤率分别达到59.77％和53.33％，与阴性对照组相比其P值均小于0.01(P＜0.01)，且未见毒副作用。因此杀菌肽-X作为一种安全有效的抗肿瘤药物，具有潜在广阔的应用前景。为了能使杀菌肽-X的研发提高到产业化规模，本文结合该工程菌的特点对其生长与表达规律进行了初步研究，建立了较稳定的中试发酵工艺，为进一步扩大规模打下了良好基础。 通过连续斜面转接实验(50次)检测重组杀菌肽-X工程菌质粒的结构稳定性；采用30L自动控制发酵罐观察不同培养基、有无选择压力和溶氧高低等培养条件对包涵体产量和质粒分裂稳定性的影响。结果表明，该工程菌质粒具有结构稳定性和分裂不稳定性。当外源蛋白表达时，便会出现分裂不稳定性，表达量越高，质粒丢失情况越严重。 经12h的培养，当采用TB和2×LB作为发酵培养基时，包涵体得率有很大差异，干重分别为1.24和0.40g/L(每升发酵液，下同)，带质粒的菌为68.5％和98.0％。发酵培养基(TB)中氨苄青霉素浓度为0和100μg/mL时，包涵体得率基本一致，干重分别为1.24和1.20g/L，带质粒的菌为68.5％和92.0％。控制溶氧为20～30％和溶氧自然变化(转速分别为250和150r/min)的条件下，包涵体得率有较大差异，干重分别为0.05，0.71和1.24g/L，带质粒的菌分别为100％，100％和68.5％。 经多次实验证明，包涵体得率可以稳定保持在1.2g/L以上，目的融合蛋白的表达量占全菌总蛋白的45～50％，占包涵体的80～90％。