Rab27A基因异常对肝癌细胞生物学行为的影响

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目的:原发性肝癌是人类最常见的恶性肿瘤之一,发病和致死率极高。其中超过90%的肝癌为肝细胞癌。全球每年新发病例约为70万,且其发病率有逐渐增高的趋势。肝癌在发展中国家的发病率高,占全世界肝癌发病的80%以上,而中国肝癌患者占全世界肝癌发病率的55%,2010年统计显示中国的发病率男性为34.7/10万,女性为13.7/10万;死亡率男性高达34.1/10万,女性为13.1/10万。近30年来,中国肝癌的死亡率一直呈上升趋势,目前对肝癌尚无有效的治疗手段,5年生存率很低。Rab27A基因作为小GTP酶Rab家族中的一员,目前是Rab家族中唯一一个与人类遗传性疾病有明确关系的成员。本研究主要探讨Rab27A基因在人肝癌细胞中的表达情况及其对肝癌细胞恶性生物学行为的影响,为肝癌的早期诊断与治疗提供靶点。  方法:为进一步明确Rab27A与肝癌发生、发展及转移的相关性,首先采用Western blot方法检测Rab27A蛋白在肝癌及癌旁组织中的表达情况,然后采用RT-PCR、Western blot方法检测Rab27A mRNA及蛋白水平在1个永生化肝细胞系和4个人肝癌细胞系中的表达情况,从而选取一个相对高表达的肝癌细胞系(HCCLM3)作为细胞模型,并通过质粒转染构建稳定的干扰细胞系,进一步采用细胞生长曲线(MTT)、平板克隆形成实验、软琼脂集落形成实验、细胞周期实验、细胞体外迁移和侵袭实验,检测干扰Rab27A后肝癌细胞的增殖能力、集落形成能力、迁移及侵袭能力的变化,以及细胞周期的变化。采用Western blot方法检测细胞周期相关蛋白的表达情况。  结果:Rab27A在肝癌组织中的表达明显高于癌旁组织。且Rab27A在1个永生化肝细胞系和4个人肝癌细胞系中均有不同程度的表达;干扰HCCLM3细胞中Rab27A的表达情况后,细胞增值实验MTT显示降低Rab27A表达水平能够抑制细胞的增殖能力;平板克隆形成实验及软琼脂集落形成实验显示干扰Rab27A可以抑制细胞的增殖及集落形成能力;细胞体外迁移和侵袭实验表明干扰Rab27A可抑制细胞的迁移侵袭能力。流失细胞分析技术检测细胞周期发现干扰Rab27A可导致HCCLM3细胞发生G1期阻滞,cyclinD1表达水平下调,而与细胞周期有关的其他的一些蛋白,cyclinB1,cyclinE,P53的表达没有明显的变化。  结论:成功构建稳定干扰Rab27A的HCCLM3细胞系后发现,Rab27A通过改变细胞周期、细胞增殖及集落形成、细胞迁移侵袭的生物学行为从而影响肝癌的发生发展过程,且Rab27A与肝癌细胞的增殖、迁移及侵袭成正相关。Rab27A可能成为潜在的肿瘤标志物用于肝癌的早期诊断及治疗。但仍需要进一步的实验研究来证明其应用价值。
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