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猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是一种由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)所引起的怀孕母猪繁殖障碍及仔猪呼吸窘迫的高死亡率接触性传染病,具有高变异性、免疫抑制和持续性感染等特征。自上个世纪80年代末初次发现以来,给全球养猪业及其产品贸易造成了 30余年的经济损害。PRRSV自上个世纪90年代中期传入至中国后对养猪业造成了巨大损失,已成为危害当前中国养猪业健康发展的主要问题之一。对于该病的控制,其现场诊断尤为重要,试纸条凭借其价格低廉、操作简易等优点而被广泛应用。但常规胶体金试纸条探针的合成方式大多基于静电吸附,合成过程易受多种因素影响,稳定性较差;故本研究欲采用构建核酸免疫胶体金探针的方式,通过提高探针性能以对传统试纸条进行改良。本研究根据GenB ank发布的PRRSV R98株基因序列,设计了一对特异性引物,通过RT-PCR扩增出PRRSVN蛋白目的基因片段,并将其定向插入至pET-28a(+)载体质粒中。对原核表达的诱导条件(IPTG浓度、诱导时间、温度)进行优化,结果显示使用终浓度0.2 mM IPTG在37℃下诱导6 h可较为高效地表达重组N蛋白。通过WB试验证实了重组蛋白成功携带His标签,经镍磁珠纯化获得了较高纯度的重组蛋白,并通过质谱分析确定了重组蛋白确实为PRRSVN蛋白。以纯化的重组蛋白作为免疫原进行小鼠免疫,经ELISA验证其血清抗体效价为1:64000;并通过WB试验及IFA试验证实了该多克隆抗体可与PRRSV特异性反应。本研究通过化学偶联方式制备核酸修饰的抗体(Ab-DNA),使用盐老化及冻融法制备核酸胶体金(DNA-GNP),核酸修饰的抗体与核酸修饰的胶体金通过碱基互补氢键作用连接,组装成核酸免疫胶体金探针(Ab-DNA-GNP,Probe)。通过蛋白定量、ELISA、RT-PCR、凝胶电泳等试验表明该方法制备的核酸免疫胶体金相较于传统静电吸附方式制备的免疫胶体金,抗体负载率高约20%、靶病毒结合率高约40%、有较好的靶特异性。通过高浓度的盐稳定性测试(NaCl终浓度为0.5 M～1M)、pH稳定性测试(pH为4～10),结果表明:核酸免疫胶体金探针,在相同的盐浓度与pH值下,其稳定性均明显优于传统静电吸附方式制备的免疫胶体金。之后,将核酸免疫胶体金探针应用于试纸条中以检测PRRSV,结果显示:PRRSV检测试纸条特异性、重复性、稳定性优良,检测限可达103 TCID50/mL。