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目的通过检测锌指蛋白ZBTB20在SLE患者B淋巴细胞中的表达情况并分析其与B细胞分化相关转录因子Blimp-1的关系,同时检测狼疮小鼠体内ZBTB20的表达,探究ZBTB20与SLE发病的相关性。方法(1)收集36例初诊未经治疗的SLE患者和30例正常对照者外周血,分离外周血单个核细胞(PBMCs)。(2)采用磁珠分选法提取PBMCs中的CD19+B细胞,并用RT-PCR技术检测CD19+B细胞中ZBTB20 m RNA与Blimp1 m RNA的表达水平(以-△△Ct值表示);采用流式细胞术检测另一管PBMCs中B细胞亚群比例。(3)分析SLE患者外周血B细胞ZBTB20 m RNA的表达与B细胞亚群(包括CD19+B细胞,CD19-CD138+浆细胞)比例变化的关系,与Blimp1m RNA表达及实验室指标抗ds-DNA抗体及免疫球蛋白Ig G的相关性。(4)狼疮模型MRL/lpr小鼠、NZB/WF1小鼠培养至25-28周发病最严重期,并以同周期的正常对照C57BL/6小鼠作为对照,ELISA法检测各组小鼠血清中抗ds-DNA抗体及免疫球蛋白Ig G水平。(5)取出小鼠的脾脏,淋巴结,及胸腺,各组织其中一部分用于制备石蜡切片用于免疫组化检测ZBTB20阳性表达,另一部分用于提取总RNA,RTPCR检测ZBTB20 m RNA、Blimp-1 m RNA的表达水平(以-△△Ct值表示)。结果(1)ZBTB20 m RNA在SLE患者组外周血CD19+B细胞中的表达水平明显高于正常对照组[(1.106±0.161)vs(2.527±0.355),P<0.05];且SLE患者组Blimp1 m RNA的表达也明显高于正常对照组[(1.106±0.161)vs(2.527±0.355),P<0.05];(2)与对照组相比,SLE患者外周血B细胞亚群比例发生变化,其中CD19+B细胞比例降低[(4.87±3.49)vs(6.92±3.85),P<0.05],而CD19-CD138+浆细胞比例和浆细胞/B细胞之间的比值均较对照组显著增高[(0.49±0.41)vs(0.27±0.25),P<0.05;(0.14±0.05)vs(0.03±0.03),P<0.05],差异有统计学意义。(3)SLE患者B细胞ZBTB20 m RNA表达与CD19-CD138+浆细胞比例和浆细胞/B细胞比值呈正比[(r=0.165,P=0.028),(r=0.225,P=0.021)],与B细胞中Blimp1 m RNA的表达呈明显的正相关性(r=0.112,P=0.039);SLE患者ZBTB20 m RNA的表达与血清中抗ds-DNA抗体,免疫球蛋白Ig G水平呈明显正相关[(r=0.415,P=0.007),(r=0.507,P=0.005)]。(4)MRL/lpr小鼠、NZB/WF1小鼠处于发病严重期,脾脏、淋巴结及胸腺均有不同程度的肿大,血清中抗ds-DNA抗体,免疫球蛋白Ig G均较对照组增高[(5.27±3.79)vs(0.71±0.65),P<0.05;(4.50±2.18)vs(0.71±0.65),P<0.05)],[(12.35±7.74)vs(1.68±0.75),P<0.05;(10.91±6.12)vs(1.68±0.75),P<0.05)],差异有统计学意义,说明构建的小鼠模型符合实验预期。(5)MRL/lpr小鼠、NZB/WF1小鼠脾脏中ZBTB20 m RNA表达明显高于正常对照组C57BL/6小鼠[(0.49±0.41)vs(0.27±0.25),P<0.05;(0.14±0.05)vs(0.03±0.03),P<0.05)],而模型组小鼠淋巴结及胸腺中ZBTB20 m RNA表达与对照组相比差异无统计学意义;且免疫组化的结果显示,ZBTB20在狼疮小鼠MRL/lpr小鼠、NZB/WF1小鼠脾脏中的表达与对照组相比阳性表达率明显增高[(21.3%vs5.2%),(40.2%vs5.2%)];而在淋巴结和胸腺中,ZBTB20的阳性表达率与对照组相比差异无统计学意义。结论1.SLE患者外周血CD19+B细胞中ZBTB20 m RNA表达较对照组明显增高,且同患者外周血CD19-CD138+浆细胞比例成正相关,与血清中自身抗体水平呈正相关,因此,ZBTB20可能与SLE发病有关;2.SLE患者ZBTB20 m RNA的表达与同样较对照组表达增高的B细胞分化关键调节因子Blimp1 m RNA表达呈正相关,说明ZBTB20参与SLE发病可能与B细胞异常分化有关;3.狼疮鼠模型实验进一步说明ZBTB20的表达与B细胞异常过度活化并分化为浆细胞分泌抗体有关,ZBTB20可能是通过这一机制参与到SLE发病的。