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研究目的1.描述甘肃串联质谱(tandemmass spectrometry,MS/MS)技术筛查新生儿遗传代谢病(inherited metabolic diseases,IMD)的现况,探讨不同筛查条件对筛查阳性率的影响,为科学制定经济、有效、可行的IMD防控策略提供依据。2.提出甘肃MS/MS非衍生化法新生儿干血斑样本中多种氨基酸、酰基肉碱指标正常参考值,探讨不同筛查条件指标参考值分布的差异,为降低甘肃省IMD筛查假阳性率、确定阳性切割值提供理论依据。研究方法1.甘肃省新生儿IMD筛查现况研究根据甘肃省2015年度(2015年度为2014年10月1日~2015年9月30日)各市州出生活产数比例,选取了31600例2016年度(2015年10月1日至2016年9月30日)在甘肃省户籍内出生的2~7天新生儿为研究对象,经新生儿家长知情同意并签字后,记录研究对象性别、出生日期、采血日期、出生体重、孕周、户籍、出生地区及母亲分娩方式,应用MS/MS非衍生化法进行IMD筛查,并对筛查阳性患儿召回、确诊及随访。统计IMD筛查阳性率、筛查阳性召回率、召回阳性率、阳性预计值、筛查总体患病率、确诊率及确诊疾病谱,比较不同性别、出生体重、孕周、户籍、出生地区、分娩方式及出生季节新生儿的IMD筛查结果,探讨筛查阳性率的影响因素。应用SPSS19.0、Excel2013进行数据整理与分析。组间比较采用四格表、R*C列联表的卡方检验或Fisher确切概率法,以α=0.05为检验水准。2.甘肃省MS/MS非衍生化法分析物正常参考值的确立根据美国临床生化研究室(national academy of clinical biochemistry,NACB)制定参考值的标准,纳入了2016年度甘肃省MS/MS筛查的31553例新生儿足跟血样本,应用MS/MS非衍生化法检测干血斑样本中11种氨基酸、31种酰基肉碱含量。研究应用SPSS19.0、Excel2013进行数据处理与统计分析,采用单样本Kolmogorov-Smirnov检验判断资料的正态性,检验结果P>0.05时符合正态分布资料,采用Levene’s对各组检测结果进行方差齐性检验,P>0.05检验数据方差齐性,符合正态分布资料及方差齐性的数据两组间比较采用t检验,不符合正态分布及方差齐性的资料两组间比较采用Mann-Whitney U检验,多组间比较采用Kruskal-Wallis H检验,取α=0.05为检验水准。正态分布资料95%的参考范围,双侧“?-1.96s~?+1.96s”,单侧上限“?+1.96s”,单侧下限“?-1.96s”;99%的参考范围,双侧“?-2.58s~?+2.58s”,单侧上限“?+2.58s”,单侧下限“?-2.58s”。非正态分布资料应用百分位数法,95%的参考范围双侧取“P2.5~P97.5”,单侧上限“P95”,单侧下限“P5”;99%的参考范围双侧取“P0.5~P99.5”,单侧上限“P99”,单侧下限为“P1”。研究结果1.甘肃省新生儿IMD筛查现况及各组间筛查阳性率比较(1)甘肃省新生儿IMD筛查阳性率为3.97%,筛查阳性召回率为83.17%,召回阳性率为27.71%,阳性预计值为4.51%,确诊疾病47例,筛查总体患病率为1.58/万。确诊遗传代谢病8种:分别为苯丙酮尿症34例(筛查患病率为1.14/万)、甲基丙二酸血症5例(0.17/万)、原发性肉碱缺乏症2例(0.07/万)、脂肪酸氧化代谢障碍2例(0.07/万)、异戊酸血症1例(0.03/万)、尿素氮循环障碍1例(0.03/万)、β-酮硫解酶缺乏症1例(0.03/万)、中链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症1例(0.03/万)。(2)新生儿男、女组筛查阳性率均为3.97%,确诊率为0.14%;低出生体重儿筛查阳性率为5.26%,确诊率为0.31%,正常体重儿筛查阳性率为3.90%,确诊率为0.15%,巨大儿筛查阳性率为4.53%,确诊率为0.06%;自然分娩筛查阳性率为4.03%,确诊率为0.14%,剖宫产筛查阳性率为3.72%,确诊率为0.20%;城镇筛查阳性率为3.98%,确诊率为0.15%,农村筛查阳性率为3.96%,确诊率为0.15%;各组间经卡方检验筛查阳性率差异无统计学意义(P>0.05),确诊率差异也无统计学意义(P>0.05)。(3)早产儿筛查阳性率为6.02%,确诊率为0.11%,正常产儿筛查阳性率为3.90%,确诊率为0.15%,过期产儿筛查阳性率为4.98%,确诊率为0.33%。各组间经卡方检验,差异具有统计学意义(P<0.05),早产儿筛查阳性率最高。确诊率各组间经Fisher确切概率法检验,差异无统计学意义(P>0.05)。(4)第一季度筛查阳性率为6.32%,确诊率为0.38%;第二季度筛查阳性率为4.28%,确诊率为0.24%;第三季度筛查阳性率为4.40%,确诊率为0.03%;第四季度筛查阳性率为0.14%,确诊率为0.02%;各组间经卡方检验,差异具有统计学意义(P<0.05)。确诊率各组间经卡方检验,差异也具有统计学意义(P<0.05)。(5)甘肃省IMD筛查阳性率较高的地区为甘南地区和西部地区,其中张掖市筛查阳性率最高。确诊率较高的地区为甘南地区和西部地区,甘南州确诊率最高。筛查阳性率各地区间经卡方检验,差异具有统计学意义(P<0.05),确诊率各地区间经Fisher确切概率法检验,差异也具有统计学意义(P<0.05)。2.MS/MS非衍生化法干血斑中分析物的参考值及组间分布的差异比较(1)11种氨基酸、31种酰基肉碱95%参考值:双侧:ALA(222.85-713.20)、ARG(1.90-31.99)、CIT(6.06-31.60)、GLY(193.93-866.46)、LEU(84.93-288.00)、MET(3.30-26.10)、ORN(35.74-223.10)、PHE(29.87-86.80)、PRO(89.06-350.97)、TYR(41.67-186.95)、VAL(66.67-252.85)、C0(10.87-48.96)、C2(2.69-24.87)、C3(0.51-3.29)、C3DC_C4OH(0.03-0.20)、C4(0.08-0.32)、C4DC_C5OH(0.10-0.33)、C5(0.05-0.32)、C5:1(0-0.01)、C5DC_C6OH(0.05-0.23)、C6(0.01-0.06)、C8(0.02-0.08)、C8:1(0.06-0.32)、C12(0.02-0.14)、C12:1(0.02-0.11)、C14:1(0.03-0.14)、C16(0.67-5.14)、C16:1(0.03-0.32)、C16:1-OH(0.02-0.08)、C18(0.31-1.32)、C18:1(0.60-2.38)、C18:2(0.09-0.52)。单侧:C6DC(0-0.11)、C10(0-0.10)、C10:1(0-0.09)、C10:2(0-0.09)、C14(0-0.28)、C14:2(0-0.03)、C14OH(0-0.02)、C16OH(0-0.03)、C18:1-OH(0-0.04)、C18OH(0-0.02)。(2)男、女组间11种氨基酸、31种酰基肉碱分析物分布经检验,C5:1、C6DC、C8:1、C10:2差异无统计学意义(P>0.05),其余各指标差异均有统计学意义(P<0.05)。(3)孕周间11种氨基酸、31种酰基肉碱分析物分布经检验,C3DC_C4OH、C5:1、C10:1、C18:2差异无统计学意义(P>0.05),其余各指标差异均有统计学意义(P<0.05)。(4)出生体重间11种氨基酸、31种酰基肉碱分析物分布经检验,CIT、PRO、C3、C4、C5:1、C8、C8:1差异具有统计学意义(P<0.05),其余各指标差异均无统计学意义(P>0.05)。(5)分娩方式间11种氨基酸、31种酰基肉碱分析物分布经检验,ALA、CIT、GLY、LEU、ORN、PRO、TYR、VAL、C4、C5、C5DC_C6OH、C6、C8:1、C10:1、C12:1、C14、C14:1、C16:1-OH、C18、C18:1-OH、C18OH差异具有统计学意义(P<0.05),其余各指标差异均无统计学意义(P>0.05)。(6)户籍间11种氨基酸、31种酰基肉碱分析物分布经检验,PHE、TYR、C3DC_C4OH、C4DC_C5OH、C5、C5:1、C14、C14OH、C16OH差异无统计学意义(P>0.05),其余指标差异均有统计学意义(P<0.05)。(7)出生季节与出生地区各组间11种氨基酸、31种酰基肉碱分析物分布经检验,所有指标差异均具有统计学意义(P<0.05)。研究结论1.甘肃省新生儿IMD筛查阳性率较高,筛查阳性召回率略低,筛查总体患病率高,甘肃省是IMD的高发地区。2.确立了适合甘肃省新生儿MS/MS非衍生化法筛查实验的11种氨基酸、31种酰基肉碱参考值。3.孕周、季节、地区影响筛查实验的筛查阳性率与确诊率;部分氨基酸、酰基肉碱根据不同性别、孕周、出生体重、分娩方式、户籍、出生季节和地区,呈现不同的分布差异。