【摘 要】
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由于人IL-12的作用具有种属特性,无法使鼠淋巴细胞产生生物反应,因此必须表达重组鼠IL-12(mIL-12),供研究该细胞因子在啮齿动物模型中的作用之用,从而研究IL-12在体内免疫反
【机 构】
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中国科学院上海生物化学和细胞生物学研究所
【出 处】
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中国科学院上海生物化学与细胞生物学研究所 中国科学院上海生物化学和细胞生物学研究所 中国科学院上海生命科学研究院生物化学
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由于人IL-12的作用具有种属特性,无法使鼠淋巴细胞产生生物反应,因此必须表达重组鼠IL-12(mIL-12),供研究该细胞因子在啮齿动物模型中的作用之用,从而研究IL-12在体内免疫反应中的作用,并且评估其临床应用前景.研究人员首先构建了两个表达载体pVL1393-mp40和pVL1393-mp35,并分别与线笥化多角体病毒基因组DNA共转染昆虫细胞株Sf9,用目视法筛选出重组病毒Ac/NPV-mp40和AcNPV-mp35,然后共感染昆虫细胞,使mp40和mp35在昆虫细胞中共表达.经实时BIA和Northern blot分析,表明重组mIL-12在昆虫细胞中表达成功.经还原条件下的SDS-PAGE分析,重组mp40和mp35的分子量分别为40KDa和22KDa.非还原条件下的Western blot结果显示,重组mIL-12的表观分子量为80KDa.用抗体捕获法在条件培液中测到了重组产物的生物活性,经与参照标准相比照,重组mIL-12的表达量约为10-15μg/10<6>细胞.
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