PI3K/AKT信号通路在神经母细胞瘤细胞增殖和分化中的作用研究

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第一部分PI3K/AKT信号通路在神经母细胞瘤细胞增殖中的作用研究目的:探讨PI3K/AKT信号通路在神经母细胞瘤细胞增殖中的作用。方法:体外培养人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞,取对数生长期细胞,接种于96孔板,接种浓度(1-5)×105/ml,每孔100ul。接种24小时后,给予LY294002处理细胞,作用24h、48h;更换无血清培养基继续培养12h后用IGF-1处理细胞,作用12h、24h;MTT法测每组细胞OD值,计算细胞存活率。结果:24h、48h后LY294002组细胞存活率小于对照组,且细胞存活率随药物浓度及作用时间的增加而降低,差异有统计学意义,对照组各浓度之间差异无统计学意义;12h、24h后IGF-1组与对照组相比,细胞存活率增加,差异有统计学意义。结论:PI3K/AKT信号通路与神经母细胞瘤细胞的增殖过程密切相关,抑制PI3K/AKT信号通路可显著阻碍神经母细胞瘤细胞增殖,而PI3K/AKT信号通路激动剂可促进神经母细胞瘤增殖。第二部分PI3K/AKT信号通路在神经母细胞瘤细胞分化中的作用研究目的:探讨PI3K/AKT信号通路在神经母细胞瘤细胞分化中的作用。方法:体外培养人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞,取对数生长期细胞,接种于6孔板,接种浓度(1-5)×10~6/ml,每孔2ml。接种24小时后,给予LY294002处理细胞;IGF-1各组先更换无血清的培养基培养细胞12h后,再用IGF-1处理细胞;LY294002作用48h后,IGF-1作用12h后,倒置显微镜下观察细胞形态有无分化改变,荧光定量PCR(FQ-PCR)法检测TrkA基因mRNA的表达水平。结果:形态学观察,LY294002组和IGF-1组均未出现明显的分化形态学改变。FQ-PCR显示LY294002组细胞TrkA表达水平较DMSO对照组、空白对照组降低,差异有统计学意义;IGF-1组TrkA表达水平较DMSO对照组、空白对照组之间差异无统计学意义。结论:PI3K/AKT信号通路可能参与了神经母细胞瘤细胞的分化过程,抑制PI3K/AKT信号通路可能抑制神经母细胞瘤细胞分化。
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