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第一部分:基于方药反证的SPID大鼠非手术模型证候属性研究。目的:对本实验课题组前期判定为气滞血瘀证的非手术SPID模型大鼠进行药物干预,反证其证候属性,并通过动物实验,初步探讨疏肝理气、活血化瘀法治疗SPID的作用机理。
方法:将证候属性判定为气滞血瘀证的SPID非手术模型大鼠93只按随机数字表法进行分组,分别为逍遥舒坤汤组(21只)、连柏汤组(21只)、盆腔炎汤组(21只)、桂枝茯苓丸组(20只)、空白对照组(10只)。给予药液灌胃,连续给药14日。观察给药前后各组大鼠中医证候评分情况,大体形态以及局部病理组织形态的变化,采用外周血流式细胞分析技术检测各组大鼠外周血中T细胞亚群CD3+、CD4+/CD8+、Th17、Foxp3的表达率,酶联免疫吸附实验检测各组大鼠组织及血清中免疫因子TNF-α、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17、TGF-β1及增生修复指标MMP-2、VEGF的蛋白分泌量,实时荧光定量核酸扩增检测系统检测各组大鼠组织及血清中细胞因子(TNF-α、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17、TGF-β1、MMP-2、VEGF)及NK细胞表面受体(NKG2D、NKG2A)mRNA转录水平。
结果:药物干预后,逍遥舒坤汤组大鼠中医证候评分结果明显降低,与治疗前比较差异有显著性(P<0.01),与其他各组(连柏汤组、盆腔炎汤组、桂枝茯苓丸组及空白对照组)比较差异均有显著性(P<0.05或P<0.01);大鼠输卵管、卵巢以及盆腔结缔组织的迂曲、粘连、水肿形态得到明显改善;盆腔结缔组织粘连Blauer评分明显降低,与其他各组比较差异均有显著性(P<0.05或P<0.01);输卵管及盆腔结缔组织切片炎症积分明显降低,与其他各组比较差异均有显著性(P<0.05或P<0.01);大鼠外周血中CD3+、CD4+/CD8+表达率升高,Th17、Foxp3表达率降低,输卵管、盆腔结缔组织及血清中TNF-α、IL-4、IL-6、IL-17、TGF-β、MMP-2、VEGF表达水平及其基因转录水平降低,IL-10表达水平及其基因转录水平升高,NKG2DmRNA转录水平降低,NKG2AmRNA转录水平升高,与其他各组比较差异均有显著性(P<0.05或P<0.01)。
结论:课题组前期应用非手术造模方法建立的SPID模型大鼠中医证候以气滞血瘀证占大多数,以疏肝理气、活血化瘀为法立方的逍遥舒坤汤对辨证为气滞血瘀证的非手术SPID模型大鼠中医证候改善及各项病理指标改变最为明显,反证了对其证候属性判定为气滞血瘀证的合理性和科学性,填补了非手术法建立SPID动物模型证候属性研究领域的空白。逍遥舒坤汤通过增加CD3+、CD4+/CD8+表达率,降低Th17、Foxp3表达率调节机体免疫机制,提高机体的免疫功能;通过降低TNF-α、IL-4、IL-6、IL-17、TGF-β1、MMP-2、VEGF以及NKG2D的表达,上调IL-10、NKG2A的表达抑制炎性细胞的浸润,减轻炎症损伤,抑制盆腔结缔组织纤维化及增生的病理变化,防止和减少粘连形成,促进组织的修复和再生,从而达到治疗SPID的目的。
第二部分:逍遥舒坤汤对SPID患者血液流变学指标的影响。目的:观察逍遥舒坤汤对SPID慢性盆腔痛(气滞血瘀证)患者的临床疗效及对患者血液流变学指标的影响,初步探讨其作用机理。
方法:将80例符合气滞血瘀型SPID,表现为慢性盆腔痛的患者按随机数字表法分为治疗组和对照组,每组各40例,其中治疗组患者服用逍遥舒坤汤,对照组患者服用坤复康胶囊。分别观察两组患者治疗前后中医症状、局部体征、疼痛程度以及血液流变学指标的变化情况。
结果:治疗后两组患者的综合疗效以及疼痛疗效比较差异有显著性(P<0.01);血液流变学各项指标用药前后组内比较,差异有显著性(P<0.01),各项指标组间比较差异有显著性(P<0.05或P<0.01)。
结论:逍遥舒坤汤能显著改善气滞血瘀型SPID患者的临床症状及体征;改善血液流变学指标,改善患者血液浓、粘、凝、滞的血瘀状态,促进盆腔血流循环,从而达到治疗目的。
方法:将证候属性判定为气滞血瘀证的SPID非手术模型大鼠93只按随机数字表法进行分组,分别为逍遥舒坤汤组(21只)、连柏汤组(21只)、盆腔炎汤组(21只)、桂枝茯苓丸组(20只)、空白对照组(10只)。给予药液灌胃,连续给药14日。观察给药前后各组大鼠中医证候评分情况,大体形态以及局部病理组织形态的变化,采用外周血流式细胞分析技术检测各组大鼠外周血中T细胞亚群CD3+、CD4+/CD8+、Th17、Foxp3的表达率,酶联免疫吸附实验检测各组大鼠组织及血清中免疫因子TNF-α、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17、TGF-β1及增生修复指标MMP-2、VEGF的蛋白分泌量,实时荧光定量核酸扩增检测系统检测各组大鼠组织及血清中细胞因子(TNF-α、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17、TGF-β1、MMP-2、VEGF)及NK细胞表面受体(NKG2D、NKG2A)mRNA转录水平。
结果:药物干预后,逍遥舒坤汤组大鼠中医证候评分结果明显降低,与治疗前比较差异有显著性(P<0.01),与其他各组(连柏汤组、盆腔炎汤组、桂枝茯苓丸组及空白对照组)比较差异均有显著性(P<0.05或P<0.01);大鼠输卵管、卵巢以及盆腔结缔组织的迂曲、粘连、水肿形态得到明显改善;盆腔结缔组织粘连Blauer评分明显降低,与其他各组比较差异均有显著性(P<0.05或P<0.01);输卵管及盆腔结缔组织切片炎症积分明显降低,与其他各组比较差异均有显著性(P<0.05或P<0.01);大鼠外周血中CD3+、CD4+/CD8+表达率升高,Th17、Foxp3表达率降低,输卵管、盆腔结缔组织及血清中TNF-α、IL-4、IL-6、IL-17、TGF-β、MMP-2、VEGF表达水平及其基因转录水平降低,IL-10表达水平及其基因转录水平升高,NKG2DmRNA转录水平降低,NKG2AmRNA转录水平升高,与其他各组比较差异均有显著性(P<0.05或P<0.01)。
结论:课题组前期应用非手术造模方法建立的SPID模型大鼠中医证候以气滞血瘀证占大多数,以疏肝理气、活血化瘀为法立方的逍遥舒坤汤对辨证为气滞血瘀证的非手术SPID模型大鼠中医证候改善及各项病理指标改变最为明显,反证了对其证候属性判定为气滞血瘀证的合理性和科学性,填补了非手术法建立SPID动物模型证候属性研究领域的空白。逍遥舒坤汤通过增加CD3+、CD4+/CD8+表达率,降低Th17、Foxp3表达率调节机体免疫机制,提高机体的免疫功能;通过降低TNF-α、IL-4、IL-6、IL-17、TGF-β1、MMP-2、VEGF以及NKG2D的表达,上调IL-10、NKG2A的表达抑制炎性细胞的浸润,减轻炎症损伤,抑制盆腔结缔组织纤维化及增生的病理变化,防止和减少粘连形成,促进组织的修复和再生,从而达到治疗SPID的目的。
第二部分:逍遥舒坤汤对SPID患者血液流变学指标的影响。目的:观察逍遥舒坤汤对SPID慢性盆腔痛(气滞血瘀证)患者的临床疗效及对患者血液流变学指标的影响,初步探讨其作用机理。
方法:将80例符合气滞血瘀型SPID,表现为慢性盆腔痛的患者按随机数字表法分为治疗组和对照组,每组各40例,其中治疗组患者服用逍遥舒坤汤,对照组患者服用坤复康胶囊。分别观察两组患者治疗前后中医症状、局部体征、疼痛程度以及血液流变学指标的变化情况。
结果:治疗后两组患者的综合疗效以及疼痛疗效比较差异有显著性(P<0.01);血液流变学各项指标用药前后组内比较,差异有显著性(P<0.01),各项指标组间比较差异有显著性(P<0.05或P<0.01)。
结论:逍遥舒坤汤能显著改善气滞血瘀型SPID患者的临床症状及体征;改善血液流变学指标,改善患者血液浓、粘、凝、滞的血瘀状态,促进盆腔血流循环,从而达到治疗目的。