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脂肪酶(Lipase，E.C.3.1.1.3)，全称为三酰基甘油酰基水解酶(triacylglycerolacylhydrolase)，它属于α/β折叠酶家族，是一种丝氨酸水解酶。脂肪酶的催化遵循丝氨酸水解酶的反应机制，能够在油水界面上将甘油三酯完全水解成脂肪酸和甘油，因而脂肪酶能够催化脂水解、脂合成和脂交换等多种反应，被应用于油脂处理、洗涤剂、食品加工、精细化工、制药、造纸等多种行业。脂肪酶在动植物的各种组织及微生物中广泛存在。
本研究从枯草芽孢杆菌基因组出发，PCR扩增出枯草芽孢杆菌脂肪酶Lip A结构基因，将其克隆进异源宿主大肠杆菌系统BL21(DE3)/pET28a(+)中表达，获得BL21(DE3)/pET28a(+)-Lip A重组系统，经金属熬合一步亲和纯化后，即得纯度在90％以上的目的蛋白，从而发展了一种方便、快速、高效生产和纯化枯草杆菌脂肪酶的方法。进一步研究了重组酶LipA的酶学性质，其最适反应pH为10，最适反应温度在40℃左右，于50℃水浴中放置1小时后仍保留80％的催化活性，常用乳化剂TritonX-100和脱氧胆酸钠对其活性有不同程度的抑制作用。Lip A对含八个碳原子的酯类底物具有最高的催化活性，其动力学参数Km值和Kcat值分别为25μM和21.2 s-1。
通过采用易错PCR的方法，在大肠杆菌系统中，对Lip A进行了酶活力定向进化研究。经第一轮易错PCR，产生了第一个库容量约为6000的易错PCR突变体库，经酶活力/细胞密度筛选，有9个OD405/OD600值较大、具有潜在高酶活力的突变体被选出。经酶活测定后，将其中一个活力最高的菌株fg-F1(L140F)作为第二轮易错PCR的亲本，产生了第二个易错PCR突变库，库容大约为4500，经筛选得到2株具有高活力的突变株f10-H1(I12WL140F/D144E)和f12-C2(R33W/L140F)，其对最适底物pNPC8的比活分别是野生型的3倍和4倍。其中f10-H1(I12V/L140F/D144E)的Km值是野生型的1/2，而f12-C2(R33W/L140F)的Kcat值是野生型的近5倍。热稳定性实验表明，在45℃水浴1小时后，野生型和突变株酶比活都没有明显损失。