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隐孢子虫病(Cryptosporidiosis)是一种以腹泻为主要症状的人兽共患寄生虫病,它是由球虫目原虫—隐孢子虫(Cryptosporidium spp)寄生于人和其他动物体内所引起的。隐孢子虫可单独致病亦可与其他病原混合感染致病,其感染途径主要是经口感染,近几年由于环境水源污染,隐孢子虫病感染者逐渐增多,免疫功能缺陷者感染隐孢子虫后可引起严重的腹泻并危及生命。隐孢子虫呈世界性分布,在澳大利亚、美国、中南美洲、亚洲、非洲和欧洲均有隐孢子虫病流行。1%~2%的艾滋病患者的死亡是由隐孢子虫感染造成的,高危人群如婴幼儿、免疫功能抑制者、免疫功能缺陷者的感染率高达15%~49%。据报道,国外发展中国家和发达国家腹泻病人中感染率分别为4%~20%和0.6%~20%,我国腹泻病人中感染率为1.4%~13.3%。隐孢子虫宿主范围非常广泛,目前已知可以感染从热带到温带的170多种动物,其中包括79种不同的哺乳动物,在鱼类,两栖类,爬行类动物中也均有分离到隐孢子虫的报道。 隐孢子虫的多宿主特性,并且由于其种类众多,在同一种内因寄生的动物不同而有许多不同的基因型,使其的流行病学调查具有一定的局限性,90年代以后分子生物学技术的发展使人们可以在分子水平上对隐孢子虫的流行特征有更深入的了解。目前许多国家和地区纷纷开展了隐孢子虫的分子流行病学研究,从与人类密切相关的猪、牛、羊等家畜和鸡、鸭、鹅等家禽类动物到两栖类,爬行类动物等,我国也开展了这方面的工作。 目前用于隐孢子虫的基因分型和流行病学调查的基因主要有18SrRNA基因、乙酰辅酶A合成酶基因、热激蛋白(HSP70)基因和肌动蛋白(actin)的基因序列等。 由于隐孢子虫18SrRNA基因在进化过程中的高度保守性,该基因序列是一种非常有效的分子标记,因此近年来国内外很多学者应用18SrRNA基因序列分析研究隐孢子虫的基因型、分子流行病学和系统进化关系,国内也开始了这方面的研究。 本研究参考国外文献,设计两对引物,应用巢式PCR技术扩增出隐孢子虫18SrRNA基因的特异性片断,结合RFLP和DNA序列分析技术,对从长春地区各种不同动物中分离到的隐孢子虫从分子水平上进行鉴定,确定其种类和基因型,并与以往的流行病学资料进行对比。结果显示从牛和家兔中分离到两种隐孢子虫,分别为C.parvum bovin基因型和C.andersoni基因型,并且在牛和家兔中分离到微小隐孢子虫的为C.parvum bovin基因A型,羊和猪中分离到的为C.parvum bovin基因B型,与以往的流行病学资料相比,牛所感染的隐孢子虫发生了新的变化,出现了新的基因型的感染,说明本地区的动物隐孢子虫