论文部分内容阅读
目的:研究F0LF0X4’j1-D-MT联合应用是否冇利于改善荷胃癌小鼠的免疫耐受系统。方法:(1)釆用脂质休转染法,构建稳定转染IDO基因的MFC细胞系,并用逆转朵酶聚合_链反应(RT-PCR)和Western blot方法检测MFC细胞IDO mRNA和蛋白表达。(2)迚化荷朽癌小鼠皮F移楨瘤模型,将其分为MFC组,空质粒组,IDO+生理盐水组、F0LF0X4飢、1-D-MT组和F0LF0X4+1-D-MT联合处理组(各组n=8),观测各组小鼠成瘤愦况,肿瘤体积差界以及病理学常规检查。(3)采用流式细胞术检测各组小鼠脾脏屮Tregs细胞和CTL细胞的数量变化。(4)采用RT-PCR检测F0XP3mRNA和颗粒酶B(GzmB) mRNA的表达量变化。结果:(1)RT-PCR品示:IDO转染组扩增出464bp的IDO基因片段,空质粒转染组与未转染组均未扩增出坫因片段。Western Blot显示:IDO转染组表达IDO蛋白,空质粒转染组4;未转染纽不表达IDO蛋白。(2)4MFC和空质粒屮现盐水组相比较,IDO斗:理盐水组肿瘤体积大,生K快,’j IDO?故水纽比较,FOLFOX4组、1-D-MT m和联介纟U肿瘤休枳均变小,项钮减好,抑瘤宇.分別为83.47%、81.82%、95.68%,?统U义(P <0.05),丨丨.联介川药组效火史好(P<0.05), Ifij FOLFOX4组-、1D-MT纟R肿瘤休枳变化无品苫性荖异(P>0.05)。(3)HE病理切片观察:各处押纽可见癌细胞密度减少,坏死区域减少。(4)流式细胞术:FOLFOX4+1-D-MT组和1-D-MT组与FOLFOX4组相比,Tregs细胞含量明显降低(P<0.05),且联合治疗组较1-D-MT组降低更明显(P<0.05),差异均具有统计学意义;相反CTL细胞含量明显升高(P<0.05),且联合治疗组较1-D-MT纟U升高史明显(P<0.05),差异均具有统计学意义。(5)RT-PCR显示:FOLFOX4+1-D-MT组和1-D-MT组与FOLFOX4组相比,FOXP3mRNA表达量明显降低(P<0.05),且联合治疗组较1-D-MT组降低更明显(P<0.05),差异均具有统计学意义;相反GzmBmRNA表达量明显升高(P<0.05),且联合治疗组较1-D-MT组升高更明显(P<0.05),差异均具有统计学意义。结论:FOLFOX4与1-D-MT联合应用通过抑制Tregs的表达,提高CTL对肿瘤细胞的杀伤活性,降低肿瘤的免疫逃逸能力。