【摘 要】
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蜱类体内的抗凝血酶对蜱在生长发育过程中的吸血和血餐消化发挥着重要的作用。本研究通过对森林革蜱(Dermacentor silvarum)cDNA文库的筛选,克隆得到了一条符合抗凝血酶特征
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蜱类体内的抗凝血酶对蜱在生长发育过程中的吸血和血餐消化发挥着重要的作用。本研究通过对森林革蜱(Dermacentor silvarum)cDNA文库的筛选,克隆得到了一条符合抗凝血酶特征的基因序列,命名为DS-AT。该序列全长616bp,开放阅读框为429bp,编码142个氨基酸。经信号肽在线预测分析,信号肽有16个氨基酸,成熟肽有126个氨基酸。功能结构域分析显示DS-AT包含两个BPTI-like结构域,属于Kunitz家族。经NCBI Blast检索发现森林革蜱抗凝血酶基因编码蛋白与boophilin蛋白的同源性是89%,以boophilin抗凝血酶氨基酸序列为模板,构建了DS-AT蛋白的三级结构模型。各组织和发育各阶段荧光定量分析表明,DS-AT主要在雌蜱和雄蜱中肠和唾液腺中表达,在若蜱、雌蜱和雄蜱中均有表达。通过原核表达,获得了DS-AT重组蛋白,其分子量约为36 KDa,并对该重组蛋白进行了抗凝血活性以及抑菌活性的检测,结果表明DS-AT重组蛋白具有抑制凝血酶的活性和一定的抑菌活性。
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