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目的:缺血性脑血管病是严重威胁人类健康和影响人们生活质量的最常见的脑血管病。其病因和发病机制较为复杂。近年来,感染和炎症与缺血性脑血管病的关系成为研究的热点。本实验目的在于检测缺血性脑血管病患者与健康对照者MBL基因Exon154位密码子点突变情况,同时测定血浆中MBL、CRP含量及肺炎衣原体感染率,旨在通过分析缺血性脑血管病这些因素的变化及相关性,同固有免疫的角度探讨缺血性脑血管病的致病因素和发病机制,并为缺血性脑血管病的预防、诊断和治疗提出依据。
方法:
1 研究对象
缺血性脑血管病组:100例,其中男62例,女38例平均年龄为(65±12)岁,均来自河北北方学院附属第一医院的住院患者。健康对照组:60例,其中男40例,女20例,平均年龄为(60±10)岁,均来自河北北方学院附属第一医院保健科的健康体检人员。
2 标本的收集与处理抽取缺血性脑血管病组和健康对照组的抗凝血3ml,分离血浆与细胞成分,血浆保存于-86℃冰箱内,供测定MBL、CRP含量、肺炎衣原体;用盐酸胍法提取血细胞中DNA,-86℃冰冻保存,供MBL基因突变检测。
3 测试标本
3.1血浆MBL含量测定:按MBLELISA试剂盒说明书。
3.2用肺炎衣原体(CP)Ig M ELISA试剂盒测定衣原体感染情况。
3.3用肺炎衣原体(CP)Ig G ELISA试剂盒测定衣原体感染情况。
3.4用免疫比浊法测定Hs.CRP含量,在全自动生化分析仪上进行。
3.5用PCR.RFLP法测试MBL Exon I 54位密码子基因点突变:扩增体系为5μl,其中10xBuffer 5μl,dNTP(2.5mmol/L)4μl,primerl(50ktmol/L)0.4μl,primer2(50/zmol/L)O.4μl,TaqDNA聚合酶(5U/μl)0.5μl,模板4μl,灭菌三蒸水补至50μl。扩增参数为:预变性95℃ 5分钟,变性95℃45秒、55℃45秒,延伸72℃1分钟,循环30次,末延伸72℃5分钟分钟。扩增产物用TAE配制含0.5μg/ml溴化乙啶2%的琼脂糖凝胶电泳,加样5μl/孔,电泳4V/cm,30分钟;PCRMarker作为参照,对扩增产物进行分析。对扩增产物用限制性内切酶(Bsh N1)酶切:酶切体系为20μl,其中:Bsh N1(10u/μl)0.5μl,10xBuffer 2μl,DNA扩增产物17.5μl。37℃水浴反应1小时。酶切结果用3%的琼脂糖凝胶电泳分析。
结果:
1 缺血性脑血管病组、健康对照组血浆MBL含量测定100例缺血性脑血管病患者血浆MBL含量的平均值为3372.179μg/L,标准差为660.90:60例健康对照组血浆MBL含量的平均值为2065.285μg/L,标准差为195.669。经t检验,t=14.913,p<0.001,二者均值比较差别有统计学意义。
2 缺血性脑血管病组、健康对照组肺炎衣原体感染测定
2.1100例缺血性脑血管病患者血浆CP IgM阳性6例,占6.00%:60例健康对照组血浆CP IgM阳性2例,占3.33%。经X<2>检验,X<2>=0.211,p=0.375,缺血性脑血管病组、健康对照组肺炎衣原体IgM阳性的比较差别无统计学意义。
2.2 100例缺血性脑血管病患者血浆CP IgG阳性58例,占58.00%;60例健康对照组血浆CP IgG阳性21例,占35.00%。经X<2>检验,X<2>=7.936,p<0.005,缺血性脑血管病组、健康对照组肺炎衣原体IgG阳性的比较差别有统计学意义。
3 缺血性脑血管病组、健康对照组血浆中CRP含量比较分析100例缺血性脑血管病患者血浆CRP含量的平均值为7.531mz/L,标准差为4.906;60例健康对照组血浆CRP含量的平均值为2.015mg/L,标准差为2.223。经t检验,t=8.32,D<0.01.,二者均值比较差别有统计学意义。
4 100例缺血性脑血管病患者CP IgG阳性和阴性组之间,血浆MBL含量的比较100例缺血性脑血管病患者中血浆CP IgG阳性58例,血浆MBI。含量的平均值为3952.76μg/L,标准差为573.473;血浆CP IgG阴性42例,血浆MBI。含量的平均值为2951.753μg/L,标准差为46.108。经t检验,t=11.270,0<0.01,二者均值比较差别有统计学意义。
5 缺血性脑血管病患者中CP IgG阳性和阴性组之间,血浆中CRP含量比较100例缺血性脑血管病患者血浆CP IgG阳性58例,血浆CRP含量的平均值为11.788mg/L,标准差为4.159;血浆CP IgG阴性42例,血浆CRP含量的平均值为4.448mg/L,标准差为1.441。经t检验,t=10.96,p<0.01,二者均值比较差别有统计学意义。
6 缺血性脑血管病患者血浆中CRP水平升高与正常组之间MBL含量比较。 100例缺血性脑血管病患者血浆标本中,56例CRP水平升高(>3mg/L)者,MBL含量平均值为3932.696μg/L,标准差为254.450;44例CRP水平正常(<3mg/L)者,MBL含量平均值为2658.793μg/L,标准差为92.604。经t检验,t=34.69,p检验,X<2>=o.002,P=0.132,缺血性脑血管病组、健康对照组基因点突变频率的比较差别无统计学意义。
结论:
1 缺血性脑血管病组血浆MBL含量高于健康对照组,二者均值比较差别有统计学意义(t=14.913,P<0.01)。
2 缺血性脑血管病组血浆CP IgM阳性率与健康对照组比较差别无统计学意义(X<2>=0.211,p=0.375)。
3 缺血性脑血管病组血浆CP IgG阳性率高于健康对照组,比较差别有统计学意义X<2>=7.936,p<0.05)。
4 缺血性脑血管病组血浆CRP含量明显高于健康对照组,二者均值比较差别有统计学意义(t=8.32,p<0.01)。
5 缺血性脑血管病组血浆中CP IgG阳性和阴性组之间血浆MBI。含量,二者均值比较差别有统计学意义(t=11.27,p<0.01.)。
6 缺血性脑血管病组血浆中CP IgG阳性和阴性组之间血浆CRP含量,二者均值比较差别有统计学意义(t=10.96,p<0.01)。
7 缺血性脑血管病组血浆中CRP水平升高与正常组之间血浆MBL含量,二者均值比较差别有统计学意义(t=34.69,p<0.01.)。
8 缺血性脑血管病组较健康对照组MBL基因Exon I 54位密码子突变频率差别无统计学意义。(X<2>=0.002,p=0.132)。