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目的：构建人NF-κB基因小干扰RNA（siRNA）重组质粒表达载体，沉默人鼻咽癌5-8F细胞中NF-κB p65基因的表达，探明NF-κB在鼻咽癌中的生物学作用，为鼻咽癌防治提供实验依据。方法：（1）根据GenBank中人NF-κB p65的表达序列，设计、合成NF-κB特异性干扰序列（siNF-κB），同时合成阴性序列（HK），合成的干扰序列的正义链和反义链退火合成双链DNA干扰片段,将干扰DNA片段亚克隆到pGenesil-1.2质粒表达载体上,构建重组NF-κB p65特异性抑制的质粒表达载体pGenesil-1.2-NF-κB和重组阴性表达质粒载体pGenesil-1.2-HK。（2）将构建的重组质粒表达载体（pGenesil-1.2-NF-κB、 pGenesil-1.2-HK）分别转入JM109菌株进行扩增培养,提取质粒并纯化。（3）应用脂质体将重组质粒表达载体（pGenesil-1.2-NF-κB、 pGenesil-1.2-HK）分别转染人鼻咽癌5-8F细胞，显微镜下观察细胞的形态，分析转染效率。（4）实验设空白对照组（未转染载体的5-8F细胞）、阴性对照组（转入pGenesil-1.2-HK质粒表达载体的5-8F细胞），实验组（转入pGenesil-1.2-NF-κB质粒表达载体的5-8F细胞）。转染48h后采用Western blotting方法检测鼻咽癌细胞中NF-κB p65基因的蛋白表达水平。采用MTT及流式细胞仪分析NF-κB沉默对鼻咽癌5-8F细胞的增殖抑制作用以及对细胞周期的影响。结果：（1）成功构建pGenesil-1.2-NF-κB重组质粒表达载体。（2）与对照组和阴性对照组比较，转入pGenesil-1.2-NF-κB重组质粒表达载体的5-8F细胞，NF-κB p65蛋白表达明显下降，对照组与阴性对照组比较，5-8F细胞NF-κB p65蛋白表达无明显差异。说明NF-κB p65siRNA能抑制5-8F中NF-κB p65的表达。（3）转入pGenesil-1.2-NF-κB重组质粒表达载体的5-8F细胞的细胞增殖抑制率为（58.43±1.24）%，与空白对照组抑制率（0）和阴性对照组抑制率（17.89±4.13）%比较，差异具有统计学意义（P＜0.05）。S期细胞为（42.27±0.39）%，与空白对照组(11.3±0.79）%和阴性对照组（34.88±0.85）%比较，差异具有显著性（P＜0.05），细胞阻滞于S期。结论：成功构建了NF-κB p65抑制的siRNA质粒表达载体。NF-κB p65表达抑制，鼻咽癌5-8F细胞的增殖能力下降，细胞周期阻滞在S期。NF-κB表达在人鼻咽癌细胞的恶性增殖中起重要作用。