论文部分内容阅读
[目的]探讨趋化因子受体CXCR3及其相关MircoRNAs在涎腺肿瘤组织中的表达,分析趋化因子受体CXCR3与相关MircoRNAs、微血管密度(MVD)的相关性以及其在涎腺肿瘤发生发展中的作用。[方法](1)选取术后口腔颌面部涎腺肿瘤组织石蜡包埋标本47例,其中涎腺腺样囊性癌28例,腮腺多形性腺瘤19例,并以19例腮腺多形性腺瘤配对的肿瘤组织旁的正常腮腺组织为对照。(2)对纳入研究的颌面部涎腺肿瘤组织常规行病理切片HE染色,以进行病例确诊和组织分型。(3) EnVision免疫组织化学法检测趋化因子受体CXCR3的表达。光镜下阅片,以胞质或胞浆内出现棕黄色颗粒为阳性着色,每张切片随机观察5个高倍视野,半定量积分法判断结果。具体标准为:①阳性细胞数:≤5%为0分,6%~25%为1分,26%~50%为2分,51%~75%为3分,>75%为4分;②阳性强度(以多数细胞判定):淡黄色为1分,黄色为2分,棕黄色为3分。以①、②两者的乘积判断阴阳性等级:0分为阴性(-),1~4分为弱阳性(+),5~8分为阳性(++),9~12分为强阳性(+++)。两人双盲法观察切片,若两人结果相差3分则重新判断。(4)微血管密度的测量采用CD34免疫组织化学染色,在光镜下以细胞胞膜、胞浆呈棕黄色或黄色颗粒着色判读为CD34阳性染色,每张切片随机观察3个高倍视野,应用Image-pro Plus 6.0专业图像分析软件对其进行半定量分析。(5)应用Targetscan软件预测与趋化因子受体CXCR3相关的MircoRNAs,选取其中与CXCR3相关度较高的miR-486-3p、 miR-149-3p及miR-122-3p进行表达分析。对石蜡包埋的各例组织进行连续切片,抽提其RNA并质检后,采用Realtime PCR方法进行扩增检测miR-486-3p、 miR-149-3p及miR-122-3p在组织中的表达量,分析它们与趋化因子受体CXCR3表达的相关性。(7)数据统计学分析采用SPSS20.0统计软件进行。[结果](1)腮腺组织存在CXCR3表达。正常腮腺组CXCR3表达结果为阴性(-)占52.63%,弱阳性(+)占31.58%,阳性(++)占10.53%,强阳性(+++)占5.26%。多形性腺瘤组CXCR3表达结果为阴性(-)占5.26%,弱阳性(+)占5.26%,阳性(++)占52.63%,强阳性(+++)占36.85%。腺样囊性癌组CXCR3表达结果为阴性(-)占7.14%,弱阳性(+)占17.86%,阳性(++)占17.86%,强阳性(+++)占57.14%。正常腮腺组、多形性腺瘤组及腺样囊性癌组中CXCR3表达强度差异有统计学意义(P<0.001);进一步行Z检验,除多形性腺瘤组和腺样囊性癌组无统计学差异,其余各组间均有统计学差异(P<0.05)。(2)正常腮腺组微血管密度为(0.28+0.07),多形性腺瘤组和涎腺腺样囊性癌组微血管密度分别为(0.42±0.12)和(0.49±0.09)。经统计学分析,三组组织微血管密度差异均有统计学差异(P<0.001),进一步行LSD-t检验,三组组间差异均有统计学意义(P<0.05)。经Spearman相关性分析发现组织中微血管密度(MVD)与趋化因子受体CXCR3的表达存在正相关关系(r=0.419, P<0.001)。(3)RealtimePCR检测发现,miR-486-3p在正常腮腺组中阳性率为68.4%,在多形性腺瘤组中为31.6%,在腺样囊性癌组中为32.1%,三组间比较表达差异有统计学意义(P=0.025),进一步行Z检验,除多形性腺瘤组和腺样囊性癌组无统计学差异,其余各组间均有统计学差异(P<0.05)。miR-149-3p在正常腮腺组中阳性率为47.4%,在多形性腺瘤组中为26.3%,在腺样囊性癌组中为39.3%,三组间比较表达差异无统计学意义(P=0.400)。miR-122-3p在正常腮腺组中阳性率为11%,在多形性腺瘤组中为11%,在腺样囊性癌组中10.7%,三组间比较表达差异无统计学意义(P=1.00)。经Spearman相关性分析发现组织中miR-486-3p与趋化因子受体CXCR3的表达存在负相关关系(r=-0.302,P=-0.013)。[结论]趋化因子受体CXCR3在涎腺肿瘤组织中的表达明显高于正常组织,而miR-486-3p的表达水平明显低于正常组织,CXCR3的表达与miR-486-3p的表达呈负相关关系而与微血管密度(MVD)呈正相关关系,提示miR-486-3p的下调可能提高CXCR3表达从而诱导涎腺肿瘤血管生成,促进肿瘤发生发展。