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吻素及其受体(Kiss1/GPR54)与繁殖系统关系密切。本研究旨在探索绵羊Kiss1/GPR54基因与睾丸发育的关系及其多态性,为进一步研究绵羊Kiss1/GPR54基因功能及其与繁殖性状的关系提供理论依据。本研究选取初生、30、60、90、120、150、180日龄的湖羊公羔各3只,测定各年龄公羊体重、体尺、阴囊周长、睾丸重和睾丸尺寸(长、宽、厚)数据,计算睾丸指数;分析睾丸重和体重的相关,用Logistic模型分别拟合体重和睾丸重,计算拐点日龄。对睾丸组织切片进行HE染色,计数曲细精管内各级生精细胞数和细胞层数,测量曲细精管直径,计算各测量值间的相关系数。用免疫组化法观察Kiss1/GPR54在睾丸中的表达和分布。用荧光定量PCR法测定Kiss1/GPR54基因在睾丸中的相对表达量,分析其与睾丸测量值间的相关。选取平均产羔数位于正态分布两尾的湖羊个体,分为高繁组和低繁组,用DNA混合池测序法检测湖羊群体Kiss1基因与GPR54基因的单核苷酸多态性位点,用卡方检验分析Kiss1/GPR54基因突变位点等位基因频率、基因型频率在两组间的差异。研究结果如下:1.睾丸重与体重显著相关,相关系数为0.895(P<0.05)。Logistic模型拟合结果表明体重和睾丸重量拐点日龄分别是98 d和113 d。120日龄的睾丸指数显著高于90日龄(P<0.05)。2.湖羊初生时曲细精管内即有精原细胞和支持细胞;90日龄时,小部分曲细精管内出现少量初级精母细胞;120日龄时,曲细精管内细胞层数增多,出现精原细胞、精母细胞、早期精子细胞及少量精子,并出现了管腔;150和180日龄曲细精管内各级生精细胞数量均增加。曲细精管直径在初生至180日龄期间不断增大,120日龄的曲细精管直径显著大于90日龄(P<0.05)。曲细精管直径与细胞层数显著相关,相关系数为0.970(P<0.05)。3.在睾丸的精原细胞、精母细胞、精子细胞和间质细胞中均检测到Kiss1和GPR54的阳性反应产物。Kiss1/GPR54基因在湖羊初生至180日龄睾丸中的mRNA相对表达量变化趋势一致。初生时两基因的相对表达量最高,初生至60日龄两基因的相对表达量显著下降(P<0.05),60-120日龄为显著上升(P<0.05),120-180日龄显著下降(P<0.05)。4.60-120日龄是湖羊睾丸重量、体积和曲细精管直径的快速增长期,Kiss1和GPR54的mRNA相对表达量与睾丸重量、睾丸体积均显著相关(P<0.05),与曲细精管直径均极显著相关(P<0.01)。5.在Kiss1基因中共检测到17个SNP位点,其中g.37C>T、g.38G>A、g.89G>T位于外显子1的5’UTR区;g.3556G>A位于外显子2的编码区,导致编码的缬氨酸变为蛋氨酸(Val>Met);有5个SNP位于内含子1,其余8个位于内含子2。g.5117T>C位点在高繁组与低繁组基因型分布差异显著(P<0.05)。g.37C>T,g.38G>A,g.89G>A、g.4783C>G、g.5117T>C五个位点的等位基因频率在高繁组与低繁组间差异显著(P<0.05)。6.在GPR54基因中检测到5个SNP位点,均位于外显子1的5’UTR区,g.2606T>C、g.2625C>A、g.2721A>C三个位点形成一个连锁区块,构成两种单倍型:TCA和CAC,在高繁组中两种单倍型均存在,在低繁组中只有TCA一种单倍型。综上所述,Kiss1/GPR54可能在诱导湖羊初情期启动、睾丸发育和精子发生过程中发挥着重要作用。Kiss1基因的g.37C>T,g.38G>A,g.89G>A、g.4783C>G、g.5117T>C位点和GPR54基因的g.2606T>C、g.2625C>A、g.2721A>C位点可能与湖羊高繁殖力有关。