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[目的]1.采用结扎股动脉方法制作周围神经缺血模型。2.探讨重组人促红细胞生成素(rhEPO)对大鼠急性缺血肢体股神经的保护作用及意义,从而为临床治疗因急性肢体缺血而引发的神经损伤提供新的思路和实验依据。[方法]1.选取健康雄性Wistar大鼠48只,随机分为重组人促红细胞生成素(rhEPO)组和生理盐水(NS)组,每组设置六小时(6h),一天(1d),两天(2d),三天(3d)四个不同时间点亚组,每组六只,通过采用单侧股动脉结扎法,建立大鼠急性下肢缺血模型。于术后第6h、1d、2d、3d、rhEPO组行腹腔注射1000IU/kg rhEPO, NS组给予相同体积的生理盐水。2.利用神经电生理检测方法,分别在6h,1d,2d,3d,通过阈强度、最大刺激强度以及传导速度,客观反应股神经感觉、运动功能,以及神经功能改变。3.运用原位要端标记技术(TUNEL),分别在6h,1d,2d,3d对股神经进行取材,评价股神经缺血损伤后重组人促红细胞生成素对神经凋亡及功能恢复的影响。4.统计学方法:所有数据以均数±标准差(x±s)表示,使用SPSS13.0软件包进行统计学分析,同一时间点不同指标的差异使用采用t检验方法,同一组不同时间点之间的比较采用单因素方差分析,P<0.05定义为差别有显著意义。[结果]1.大体观察:术后NS组和rhEPO组大鼠术侧足趾及脚掌的颜色均发青,随着时间的推移,NS组较rhEPO组颜色加深程度明显。NS组大鼠5趾乏力并拢,rhEPO组大鼠5趾稍分开。两组大鼠在术后6h即出现跛行,EPO组2天后跛行不明显。无足趾破溃和皮肤溃疡。EPO组后肢及足趾对热、痛刺激较NS组敏感,但较健侧稍差。rhEPO组大鼠运动相对灵活,爬行速度较快,NS组活动相对局限,速度缓慢。拆除缝合线,打开缝合切口,可见术后两组Wistar大鼠小腿肌肉都有不同程度的萎缩,颜色灰白,股神经肿胀、增粗。2.神经电生理:2.1rhEPO组股神经的阈强度分别在6h(0.008±0.005)、2d(0.180±0.011)、3d (0.022±0.0189)明显优于NS组,即rhEPO组股神经的阈强度在6h、2d、3d中明显低于NS组,其差异有统计学意义(P<0.05)。经单因素方差分析可知,两组指标随着时间的变化差别有统计学意义(F=4.524, P=0.014; F=7.494, P=0.001)。2.2rhEPO组股神经的最大刺激强度在各个时间点(6h:0.219±0.088;1d:0.200±0.042;2d:0.296±0.082;3d:0.358±0.025)均优于NS组(6h:47.778±10.472;1d:37.055±3.270;2d:34.388±4.484;3d:29.657±7.940),其差异有统计学意义(P<0.05)。经单因素方差分析可知,两组指标随着时间的变化差别有统计学意义(F=13.832, P<0.001; F=4.478, P=0.015)。2.3rhEPO组股神经传导速度在各个时间点(6h:72.225±13.607;1d:58.335±9.131;2d:53.112±6.690;3d:52.557±11.667)均优于NS组(6h:47.778±10.472;1d:37.055±3.270;2d:34.388±4.484;3d:29.657±7.940),其差异有统计学意义(P<0.05)。经单因素方差分析可知,rhEPO组内各时间点的传导速度差别无统计、学意义(P>0.05),NS组传导速度随时间的变化差别有统计学意义(F=9.482, P<0.001; F=1.073, P=0.383)。3.神经细胞凋亡率:rhEPO组股神经细胞凋亡率分别在6h(0.071±0.020)和2d(0.143±0.035)明显优于NS组(6h:0.186±0.085;2d:0.366±0.054),差别有统计学意义(P<0.05),rhEPO组股神经细胞凋亡率明显低于NS组,即在6h和2d这两个时间点,rhEPO组股神经细胞凋亡量少于NS组。经单因素方差分析,两组指标随着时间的变化差别有统计学意义(F=35.527,P<0.001;F=24.760,P<0.001)[结论]重组人促红细胞生成素是一种有效的神经保护剂,早期使用重组人促红细胞生成素可以有效减少缺血神经元的凋亡,保护急性缺血下神经功能以及促进神经功能的恢复,为将来临床上采用rhEPO赢得手术时机以及治疗因急性肢体缺血而引发的神经损伤提供新的思路和实验依据。