在眼科疾病中,视网膜血管渗漏、出血是人类致盲的主要原因之一。视网膜血管屏障(Blood-Retinal Barrier,BRB)的改变在视网膜疾病的发展中起着至关重要的作用。糖尿病视网膜病变和年龄相关性黄斑变性是两种最常见的视网膜疾病,BRB的病变与它们直接相关。因此,我们旨在建立筛选增强视网膜血管内皮细胞稳定性的药物筛选平台,期望通过该平台筛选出能够有效抑制血管内皮细胞稳定性降低的小分子化合物,增强BRB的屏障作用。然后对活性化合物进行结构活性相关性分析,寻找其结构活性中心。本实验选用了艾森生物有限公司xCELLigene RTCA检测系统,实时检测细胞基质电阻值的改变--电极细胞基质阻抗传感(Electric Cell-substrate Impedance Sensing,ECIS),建立增强血管内皮细胞单层稳定性的高通量药物筛选平台,并筛选了2100个由已知活性化合物组成的小分子化合物库。两种不同的检测血管内皮细胞单层渗漏的实验方法——XPerT实验和Transwell渗漏实验作为二级筛选,随后探究了Apigenin增强血管内皮稳定性的分子信号机制和结构活性相关性分析。此外,我们探究了小分子化合物(Ethaverine hydrochloride、Apigenin、Deguelin和Dihydrocelastrol)抑制不同细胞因子和生长因子诱导单层人视网膜微血管内皮细胞通透性增高,同时我们还将该平台拓展应用到稳定多种组织和器官的血管内皮屏障功能完整性。ECIS实验检测到IL-1β能够诱导单层人视网膜微血管内皮细胞通透性改变,通过该药物筛选平台得到了4种抑制IL-1β诱导的血管内皮细胞通透性增高的小分子化合物。结果显示,这4种小分子化合物能够抑制多种细胞因子和生长因子(TNFα、VEGF和Thrombin)诱导的血管渗漏的作用。除了HRMEC细胞外,这4种小分子化合物还能抑制HMVEC-d、HUVEC和HSMEC细胞的血管渗漏。XPeTt实验表明,在人视网膜微血管内皮细胞中这4种小分子化合物能够有效的抑制IL-1β、TNFα和Thrombin诱导的血管内皮细胞单层通透性增加。Transwell渗漏实验结果显示,在HSMEC细胞中这4种化合物能够抑制IL-6诱导的血管内皮细胞单层通透性的增高。此外,探究这4种小分子化合物对人视网膜微血管内皮细胞增殖的影响时,发现药物浓度与细胞的增殖情况呈负相关。通过一系列的实验证明了艾森生物有限公司的xCELLigene RTCA实时检测系统,能够用于筛选增加血管内皮细胞单层稳定性增高的小分子化合物。建立了一个基于检测细胞基质电阻值变化的细胞表型药物筛选平台,该药物筛选平台可以筛选出增强BRB功能完整性的药物。4种小分子化合物对于其他诱导血管内皮细胞通透性变化的细胞因子和生长因子具有相似的效果,它们在多种器官和组织中均能抑制IL-1β诱导的血管内皮细胞通透性增加。