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第一部分：小分子抑制剂HDM2i对CML和AML细胞的生长抑制作用及其机制研究目的：研究和比较小分子抑制剂HDM2i对AML和CML来源的血液系统恶性肿瘤细胞株的生长抑制作用及诱导凋亡的情况。并初步探索HDM2i抗CML非凋亡依赖的分子机制。方法：MTT法检测生长抑制作用,台盼蓝染色法检测细胞活性,集落培养法观察细胞克隆情况,hoechst染色法、AV/PI流式细胞检测术检测细胞凋亡情况,Real-Time PCR检测Bcr/Abl mRNA表达水平以及western blot法检测Caspase9/8/3. PARP. Bcr/Abl及其下游通路蛋白的表达情况。采用SPSS11.5统计处理软件分析,以p<0.05作为有差别统计学意义,并采取了CalcuSyn软件进行联合指数法分析。结果：1.HDM2i能通过诱导凋亡而起到抗AML作用；2.HDM2i抗CML增殖的机制是非凋亡依赖的,而是靶向白血病融合蛋白Bcr/Abl,抑制其下游信号通路(p-CRKL,JAK-Stat5, p-AKT等)起到抗CML增殖作用；3.HDM2i抗CML作用的效果明显强于传统上调p53蛋白的小分子抑制剂Nutlin3,且并不依赖细胞内p53蛋白的活性,因此HDM2i较Nutlin3具有更强的抑癌作用。HDM2i增强传统Bcr/Abl抑制剂PD180970下调Bcr/Abl,诱导CML细胞株发生明显凋亡,二者具有协同抗CML作用。第二部分：小分子抑制剂HDM2i协同溶癌腺病毒SG511-BECN诱导CML自噬性死亡及其机制研究。目的：研究小分子抑制剂HDM2i诱导CML细胞发生自噬及其分子机制,且溶癌腺病毒SG511-BECN增强HDM2i诱导的自噬具有协同抗CML作用,并通过体内外实验,探讨HDM2i联合SG511-BECN协同抗CML的自噬性死亡机制,以期为临床白血病治疗提供新的方法和策略。方法：通过荧光显微镜观察LC3-GFP-K562荧光改变、AVO染色激光共聚焦观察荧光自噬小体及透射电镜观察自噬小体等方法检测自噬的发生,MTT法检测生长抑制作用,结晶紫染色法检测细胞活性,集落培养法观察细胞克隆情况,hoechst染色法、AV/PI流式细胞检测术检测细胞凋亡情况,TCID50法检测病毒扩增水平,western blot (?)去检测Caspase9/3. PARP和自噬相关蛋白的表达情况。构建SCID小鼠荷瘤模型并检测药物对小鼠荷瘤的影响。采用SPSS11.5统计处理软件分析,以p<0.05作为有差别统计学意义,并采取了CalcuSyn软件进行联合指数法分析。结果：1.HDM2i能上调beclin-1基因而诱导CML细胞发生自噬,并且证明了该自噬在肿瘤中起非保护作用；2.携带beclin-1基因的新型溶癌腺病毒SG511-BECN能够诱导CML细胞发生自噬性死亡；3SG511-BECN能够增强HDM2i诱导CML细胞beclin-1蛋白的表达,增强自噬,且二者在体内外具有协同抗CML作用；4.实验最后通过一系列的毒理实验,证明了SG511-BECN. HDM2i及其联用对正常肝脏细胞L02、骨髓正常干(祖)系细胞无毒性作用,进一步证明了SG511-BECN、 HDM2i对于治疗白血病具有肿瘤靶向性。结论：通过体内外的一系列研究,小分子抑制剂HDM2i具有抗白血病作用并不依赖于p53,对CML和AML p53突变的细胞株都具有明显的生长抑制作用：通过诱导凋亡起到抗AML作用,能够下调Bcr/Abl而发挥抗CML增殖作用,且与传统的Bcr/Abl抑制剂PD180970具有协同作用。HDM2i通过上调beclin-1蛋白的表达,诱导CML细胞发生自噬,且溶癌腺病毒SG511-BECN增强其诱导的自噬能够导致CML发生自噬性死亡,在体内外发挥协同抗CML作用,且具有肿瘤靶向性特点,以期为临床白血病治疗提供新的方法和策略。