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第一部分糖皮质激素诱导的亮氨酸拉链蛋白（GILZ）在人气道上皮细胞9HTE中的表达目的：明确糖皮质激素（GCs）地塞米松（DEX）诱导GILZ在人气道上皮细胞9HTE中的表达。方法：RT-PCR及Western Blot法检测DEX在不同时间点6小时、12小时及24小时作用后GILZ mRNA及蛋白的表达情况，同时细胞免疫荧光法检测GILZ蛋白的定位。结果：正常情况下，GILZ mRNA及蛋白在人气道上皮细胞9HTE的表达较低，而在DEX作用下GILZ mRNA及蛋白的表达均出现明显改变，6小时即明显增高，24小时仍持续高表达，同时观察到GILZ蛋白在9HTE细胞中主要定位在细胞质。结论：DEX能够快速并明显诱导人气道上皮细胞9HTE中GILZmRNA及蛋白的表达。第二部分小干扰RNA（si-RNA）沉默GILZ的筛选及鉴定目的：通过si-RNA技术设计合成三条GILZ siRNAs并筛选出GILZ沉默效果最佳的一条si-RNA用于后续实验。方法：设计并合成三条GILZ siRNAs：GILZ1si-RNA、GILZ2si-RNA及GILZ3si-RNA，通过脂质体2000分别转染进人气道上皮细胞9HTE，于沉默48小时后，收集细胞用Realtime-PCR、Western Blot及细胞免疫荧光法筛选并鉴定出沉默效果最佳的一条GILZ si-RNA。结果：通过对GILZ1si-RNA、GILZ2si-RNA及GILZ3si-RNA三条GILZ siRNAs的转染，筛选出GILZ3si-RNA为最佳的一条GILZsi-RNA，Realtime-PCR检测GILZ基因沉默效率平均可达55.8%，而通过Western Blot及细胞免疫荧光的检测发现其蛋白沉默效果显著。结论：通过si-RNA技术，成功合成鉴定获得一条沉默效果最佳的GILZ si-RNA，此为用于后续实验的关键。第三部分GILZ介导糖皮质激素抑制气道上皮细胞修复的研究目的：探讨GILZ介导GCs对MAPK-ERK信号通路、增殖及迁移的影响，明确其对气道上皮细胞修复的抑制作用。方法：在non-specific si-RNA及GILZ si-RNA转染48小时后收集细胞，Western Blot法检测人气道上皮细胞9HTE中Raf-1、Mek1/2、Erk1/2（MAPK-ERK信号通路因子）磷酸化蛋白及其总蛋白的表达，MTT、CFSE标记法检测细胞增殖情况，细胞划痕及transwell法检测细胞迁移情况。结果：DEX抑制了人气道上皮细胞9HTE中MAPK-ERK信号通路Raf-1、Mek1/2、Erk1/2磷酸化蛋白的表达，而对总蛋白的表达无明显影响，即抑制了MAPK-ERK信号通路的激活，同时也观察到DEX抑制了细胞的增殖和迁移。而GILZ si-RNA转染进人气道上皮细胞9HTE，GILZ的表达被抑制后，DEX对气道上皮细胞MAPK-ERK信号通路、增殖及迁移的抑制作用均明显减轻。结论：DEX能够抑制MAPK-ERK信号通路的激活、增殖及迁移，从而抑制了气道上皮细胞的修复作用，而DEX的这一抑制作用主要是通过GILZ介导的。第四部分维生素A对糖皮质激素抑制气道上皮细胞修复的干预研究目的：明确维生素A（VitA）在人气道上皮细胞9HTE中对GCs抑制气道上皮细胞修复的影响。方法：通过DEX及全反式维甲酸（ATRA）2干预24h后，ELISA法检测人气道上皮细胞9HTE培养上清液中EGF的表达，细胞免疫荧光及Western Blot法检测EGFR及磷酸化EGFR的表达；同时WesternBlot检测人气道上皮细胞9HTE中Raf-1、Mek1/2、Erk1/2（MAPK-ERK信号通路因子）磷酸化蛋白及其总蛋白的表达，MTT法检测细胞增殖情况，细胞划痕及transwell实验检测细胞迁移情况。结果：ATRA对人气道上皮细胞9HTE EGF的分泌无明显影响，但对EGFR及其磷酸化的蛋白的表达有促进作用。ATRA同时也增加了MAPK-ERK信号通路Raf-1、Mek1/2、Erk1/2磷酸化蛋白的表达从而减轻了DEX对MAPK-ERK信号通路激活的抑制作用；ATRA在早期对细胞增殖无明显影响，但明显促进了9HTE细胞的迁移。结论：ATRA能够诱导EGFR磷酸化蛋白的表达从而激活EGFR信号通路，这也激活了下游的MAPK-ERK信号通路并促进了9HTE细胞的迁移，从而降低了DEX抑制气道上皮细胞修复的副效应。