兽药多残留悬浮芯片技术研究

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悬浮芯片技术是最近几十年兴起的多元分析方法,广泛应用于蛋白质和核酸检测。微球是悬浮芯片技术的重要载体。本文尝试先利用分散聚合方法合成单分散聚苯乙烯微球,再用沉降分离法分离获得目标微球,最后用后修饰法在微球表面修饰羧基,成功制得粒径约为5435nm,带羧基的单分散聚苯乙烯微球。这为以后研制悬浮芯片系统配套使用的荧光微球奠定扎实的基础。  实验证明二抗上标记的PE荧光信号能被悬浮芯片系统所识别,并成功地将兽药抗原偶联到微球上。之后优化了反应条件,偶联时七种兽药抗原的最佳加入量为:甲硝唑4μg,呋喃唑酮8μg,莱克多巴胺4μg,沙丁胺醇2μg,克伦特罗4μg,磺胺二甲嘧啶4μg,磺胺喹恶啉8μg;反应时,兽药抗体的最佳加入量为:莱克多巴胺5ng,沙丁胺醇10ng,克伦特罗20ng,磺胺喹恶啉10ng,磺胺二甲嘧啶20ng,甲硝唑200ng,呋喃唑酮100ng;羊抗兔PE标记二抗、羊抗鼠PE标记二抗的最佳稀释倍数分别为300、150;而最适的一抗孵育、二抗孵育时间分别为60min、45min。基于优化后的实验参数,根据间接竞争法,兽药抗原偶联微球作为探针与靶分子共同竞争兽药抗体,再以PE标记二抗作为报告信号,建立了莱克多巴胺、克伦特罗、沙丁胺醇、磺胺二甲嘧啶、磺胺喹恶啉、呋喃唑酮代谢物、甲硝唑七种兽药的悬浮芯片技术单一检测方法。该单一兽药检测方法灵敏度高,线性范围宽,特异性强,回收率均在73.2%~108.3%之间。其中,莱克多巴胺、克伦特罗、沙丁胺醇、磺胺二甲嘧啶、磺胺喹恶啉、呋喃唑酮代谢物、甲硝唑的检出限分别达到0.81、0.094、0.83、0.112、0.066、0.28、0.95ng/mL。  基于单一兽药残留悬浮芯片技术检测方法和特异性识别实验,建立了该七种兽药同时测定的多残留悬浮芯片技术分析方法。该多残留分析方法对莱克多巴胺、克伦特罗、沙丁胺醇、磺胺二甲嘧啶、磺胺喹恶啉、呋喃唑酮代谢物、甲硝唑的检测范围分别为1.00~200、0.20~100、1.00~100、0.20~100、0.10~100、1.00~50、1.00~100ng/mL,检出限分别为0.93、0.16、0.85、0.16、0.094、0.80、0.89ng/mL。七种兽药的结构类似物对检测无明显干扰反应。除了 AOZ,其余兽药的回收率均在70%~120%之间。这证明本多残留分析方法具有灵敏度高、特异性强、线性范围宽、回收率良好等优点。与酶联免疫吸附分析法相比较,悬浮芯片技术不仅具有多元分析的特性,而且在检测范围、最低检测限等许多方面也优于ELISA。  综上,悬浮芯片技术是一种优秀的兽药多残留分析的快速检测方法,为食品中污染物多残留快速分析提供全新的方法。
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