拉坦前列素游离酸对人Tenon囊成纤维细胞增殖和CTGF表达的影响

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目的:长期使用抗青光眼药物的患者行滤过手术后,滤过道瘢痕化的发生率可能高于无用药史的患者。前列腺素类药物是目前认为最安全、最有效的局部抗青光眼药物,临床上应用广泛。本实验研究拉坦前列素的活性成分拉坦前列素游离酸(latanoprost free acid,Lat-FA)对Tenon囊成纤维细胞(human Tenon fibroblastcells, HTFs)HTFs增殖和分泌结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)的影响,并对其调控机制进行初步研究。方法:遵照赫尔辛基宣言,征得病人同意后手术取眼科无青光眼病史的白内障病人Tenon囊组织,原代培养Tenon囊成纤维细胞(HTFs),光学像差显微镜和吉姆萨(Giemsa)染色观察细胞形态。1. CCK-8试剂盒检测不同时间不同浓度拉坦前列素游离酸(Lat-FA)作用于HTFs的OD值。2.酶联免疫吸附试验(ELISA)检测Lat-FA对HTFs分泌CTGF的影响。3.应用MAPK信号通路阻断剂条件下,采用ELISA检测Lat-FA对HTFs分泌CTGF的影响。结果:1.不同浓度0ng/ml、0.5ng/ml、5ng/ml、50ng/ml、500ng/ml、5000ng/mlLat-FA作用于HTFs测得OD值分别为:0.334±0.011,0.336±0.010,0.338±0.009,0.359±0.011,0.389±0.018,0.424±0.021,与对照组相比0.5ng/ml、5ng/ml组P值分别为0.665、0.375,无统计学差异,其余三组统计学均有显著性差异(P<0.05);不同时间段24h、48h、72h Lat-FA作用于HTFs测得OD值分别为:0.349±0.030,0.361±0.032,0.379±0.039,24h与48小时间无统计学差异(P=0.088),72h组与其余两组比较均存在显著的统计学差异(P<0.05)。2. Lat-FA处理HTFs24h后ELISA检测不同组分泌CTGF:对照组为83.577±2.752ng/L,Lat-FA组为108.710±3.654ng/L;Lat-FA组与对照组相比,具有统计学差异(P<0.05)。3. Lat-FA处理HTFs前,使用SP600125、SB203580、UO126三种MAPK信号通路亚家族阻断剂,作用HTFs0.5小时,分为Lat-FA组、Lat-FA+SP600125组、Lat-FA+SB203580组和Lat-FA+UO126组ELISA,共四组。Lat-FA处理细胞24小时后ELISA测得CTGF分泌量分别为:108.710±3.654ng/L,75.199±3.040ng/L,84.507±4.239ng/L,99.091±6.359ng/L;使用不同MAPK信号通路特异性阻断剂的三组与Lat-FA组相比,均存在统计学差异(P<0.05)。结论: Lat-FA对HTFs具有一定的促增殖作用,且该作用可能与时间和浓度存在一定相关性;Lat-FA能上调HTFs分泌CTGF; Lat-FA可通过MAPK信号通路上调CTGF分泌。
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