丁香酚体外抗阿萨希毛孢子菌的敏感性研究及其作用机制探讨

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研究目的1.体外观察中药单体-丁香酚对阿萨希毛孢子菌(Trichosporon asahii,T.asahii)的生长发育是否有影响,以及T.asahii对不同浓度的丁香酚药液的敏感性如何。2.通过观察电镜下不同浓度丁香酚药液作用后T.asahii的形态和超微结构的变化,初步探讨、分析其可能的作用机制。3.为开发中草药抗T.asahii提供理论和实验依据。研究方法1.参照美国临床实验室标准研究所(NCCLS)2008年版酵母菌药敏实验方案M27-A3[1],以13株T.asahii为研究对象,检测丁香酚对13株T.asahii的最低抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MFC)。2.以T.asahii临床标准株(CBS2479)为研究对象,肉眼观察固体培养基培养下不同浓度丁香酚药液对菌株菌落生长情况的影响,并与生长对照相比较。3.以T.asahii临床标准株(CBS2479)为研究对象,应用紫外分光光度计测定不同浓度丁香酚药液对不同培养阶段的T.asahii的吸光度值(A),绘制曲线,并与生长对照相比较。4.以T.asahii临床标准株(CBS2479)为研究对象,采用震荡培养,在倒置显微镜下观察丁香酚药液作用后的T.asahii在不同培养阶段的菌株形态变化和生长发育情况,并与生长对照相比较;采用96孔微量培养板培养,在倒置显微镜下观察不同浓度丁香酚药液作用一段时间(12h)后T.asahii的菌株形态变化和生长发育情况,并与生长对照相比较。5.以T.asahii临床标准株(CBS2479)为研究对象,分别在扫描电镜和透射电镜下观察不同浓度丁香酚药液作用一段时间(3-5天)后T.asahii的形态和超微结构的变化,并与生长对照相比较。结果1.药敏结果显示,丁香酚对13株T.asahii均有不同程度的抑制作用,随药液浓度升高,各孔呈现的真菌生长情况不同。2.肉眼观察发现,临床标准株CBS2479在加入不同浓度丁香酚药液的PDA培养基上的菌落生长情况不同。3.通过紫外分光光度计的测定,发现不同浓度丁香酚药液作用下的T.asahii的生长曲线表现不同。4.光镜下观察发现,在震荡培养法培养下,丁香酚药液作用后的T.asahii在不同培养阶段的菌体形态变化和生长发育情况不同;在96孔微量培养板法培养下,不同浓度丁香酚药液作用一段时间(12h)后T.asahii的菌体形态变化和生长发育情况不同。5.电镜下观察发现,不同浓度丁香酚药液作用一段时间(3-5天)后T.asahii的菌体形态和超微结构不同。结论1.中药单体-丁香酚对T.asahii具有明显的抑菌和杀菌作用,不同浓度的丁香酚药液可使菌株的生长、菌体形态和超微结构的改变表现出明显差异。2.通过电镜观察,提示中药单体-丁香酚对T.asahii的作用机制可能为对细胞壁和细胞膜的直接破坏。3.中药单体-丁香酚可能成为治疗T.asahii的新型药物,本实验从敏感性研究、形态学观察、电镜观察方面为中药单体-丁香酚体外抗T.asahii提供了初步的理论依据,尚需更深层次的体外实验、体内实验、临床试验等进一步研究的证实。
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