【摘 要】
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目的1.明确CD147是否能够调控内皮细胞功能来参与血管新生;2.明确CD147调控内皮细胞功能的作用是否通过Akt-FoxO3a信号通路实现。方法1.实验分组,第一部分实验分为4组:空白对照组（培养基）、CD147激动组（培养基+重组CD147蛋白）、CD147抑制组[培养基+重组CD147蛋白+CD147 小干扰 RNA（small interfering RNA,siRNA）]、阴性对照组（
【基金项目】
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江苏省卫生健康委基金（H2018004）； 江苏省青年医学重点人才培养基金（QNRC2016837）；
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目的1.明确CD147是否能够调控内皮细胞功能来参与血管新生;2.明确CD147调控内皮细胞功能的作用是否通过Akt-FoxO3a信号通路实现。方法1.实验分组,第一部分实验分为4组:空白对照组（培养基）、CD147激动组（培养基+重组CD147蛋白）、CD147抑制组[培养基+重组CD147蛋白+CD147 小干扰 RNA（small interfering RNA,siRNA）]、阴性对照组（培养基+重组CD147蛋白+阴性siRNA）;第二部分实验分为3组:空白对照组（培养基）、CD147激动组（培养基+重组CD147蛋白）、LY294002抑制组（培养基+重组CD147蛋白+LY294002）。2.细胞实验:（1）通过细胞计数试剂盒（Cell Counting Kit-8,CCK-8）检测内皮细胞的增殖情况,Transwell迁移实验及划痕实验检测内皮细胞的迁移能力,细胞成管实验检测内皮细胞的管腔形成能力,Western blot检测蛋白激酶B（Protein kinase B,PKB/Akt）、磷酸化 Akt（phosphorylated Akt,p-Akt）、FoxO3a、磷酸化 FoxO3a（phosphorylatedFoxO3a,p-FoxO3a）蛋白的表达水平;（2）加入LY294002干预Akt-FoxO3a信号通路,重复上述实验方法,检测该通路对CD147介导的内皮细胞增殖、迁移及成管能力的影响。3.离体实验:取C57BL/6J小鼠胸主动脉,构建离体动脉环血管新生模型,按照上述实验分组分别予以相应的处理,显微镜下观察各组动脉环新生微血管生长情况,并分析:（1）CD147对动脉环新生微血管分支数量的影响;（2）干预Akt-FoxO3a信号通路对CD147介导的动脉环新生微血管分支数量的影响。结果1.激动CD147后内皮细胞的增殖、迁移及管腔形成能力高于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）,p-Akt、p-FoxO3a的表达水平较对照组上调（P＜0.05）,而Akt、FoxO3a的表达与对照组无明显差异（P＞0.05）;抑制CD147后内皮细胞的增殖、迁移及管腔形成能力较激动组下降（P＜0.05）,p-Akt、p-FoxO3 a蛋白的表达水平较激动组均下调（P＜0.05）,同时Akt、FoxO3a蛋白表达与激动组相比均无明显变化（P＞0.05）。2.使用重组蛋白激动CD147后离体动脉环新生微血管分支数量高于对照组,（P＜0.05）;CD147-siRNA抑制CD147表达后动脉环新生微血管分支数量低于激动组（P＜0.05）。3.LY294002抑制组内皮细胞增殖、迁移及成管能力较单纯予以重组CD147蛋白处理的激动组均降低（P＜0.05）,离体动脉环新生微血管分支数量也明显下降（P＜0.05）。结论1.CD147信号激活可促进内皮细胞增殖、迁移、成管及离体动脉环血管生成;2.CD147信号激活可促进内皮细胞Akt、FoxO3a磷酸化;3.CD147通过Akt-FoxO3a信号通路调控内皮细胞功能参与血管新生。
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