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宫颈癌可见于各年龄段的女性,是女性生殖道最常见的恶性肿瘤之一,宫颈癌的预防与诊治一直备受关注。然而目前临床上常选用的辅助治疗手段--化疗却一直存在着不可忽视的毒副作用及耐药性等问题。因此,找寻安全性高、能克服多药耐药的高效化疗药物迫在眉睫。天然药物(如抗生素)是抗肿瘤药物的重要来源之一。很多研究证明莫能菌素具有潜在的抗癌效用,但目前对莫能菌素诱导宫颈癌细胞作用机制尚不清楚。因此本研究以人宫颈癌Hela细胞作为研究对象,初步探究莫能菌素诱导Hela细胞凋亡的机制。实验通过MTT法检测存活率,分析莫能菌素抑制体外培养的Hela细胞增殖的作用;应用倒置相差显微镜观测Hela细胞的形态变化;姬姆萨染色法和吖啶橙染色法检测Hela细胞凋亡的细胞核形态变化;凋亡鉴定:应用琼脂糖凝胶电泳法检测莫能菌素对细胞DNA断裂的影响,应用Annexin V-FITC/PI法分析不同浓度的莫能菌素对Hela细胞凋亡率的影响;采用caspase活性检测试剂盒检测莫能菌素对凋亡相关caspase酶活性的影响;通过加入不同的caspase抑制剂检验莫能菌素对Hela细胞存活率的影响;通过蛋白质印迹检测药物处理后凋亡相关蛋白的表达变化;使用微板检测系统检测莫能菌素处理后线粒体膜电位及细胞ROS水平的改变。研究主要结果如下:1.MTT结果显示:一定浓度范围内,随着莫能菌素浓度的升高及时间的延长,Hela细胞存活率逐渐降低。2.形态学变化:对照组细胞生长状态良好,呈多角形、排列紧密,莫能菌素处理细胞48h后,细胞表面变圆,出现凋亡小体;细胞核染色质凝集、边缘化,部分出现核物质断裂现象。3.琼脂糖凝胶电泳结果显示药物处理细胞48h以后,呈现梯状条带,表明凋亡的出现;Annexin V-FITC/PI检测显示随着莫能菌素剂量增加,细胞凋亡率显著升高,表明莫能菌素可以高效诱导Hela细胞凋亡。4.caspase活性检测试剂盒结果显示:caspase-3/4/8/9参与了莫能菌素诱导的Hela细胞凋亡,而caspase-6没有参与,加入相对应的caspase抑制剂后进一步验证了此观点;5.蛋白质印迹显示:线粒体介导的凋亡途径中凋亡促进蛋白Bax增多,凋亡抑制蛋白Bcl-2、Bcl-xl减少,caspase-3切割底物PARP被切割。6.全功能微板检测结果表明:一定浓度范围内,莫能菌素能引起线粒体膜电位去极化并引起活性氧的蓄积,造成细胞内氧化还原平衡状态丧失。得出以下结论:1.莫能菌素可显著抑制Hela细胞增殖,并且呈现时间和浓度依赖性;2.莫能菌素能够诱导Hela细胞凋亡,caspase-3/4/8/9参与了该过程;3.莫能菌素可通过线粒体介导的凋亡途径诱导Hela细胞凋亡。