论文部分内容阅读
目的:探讨二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)对MGC803胃癌细胞能量代谢的影响,明确DADS可通过靶向抑制AMPKα1干扰胃癌细胞能量代谢,为临床上DADS应用于胃癌的治疗提供更明确的理论基础。方法:体外培养MGC-803胃癌细胞,应用不同浓度的DADS(0mg/L、10mg/L、20mg/L、40mg/L)处理MGC-803细胞48小时后,运用比色法检测培养细胞上清液中葡萄糖及乳酸浓度的变化,q RT-PCR检测AMPKα1 m RNA表达情况,Western blot检测AMPKα1和LDHA蛋白的表达;选取最佳DADS干预浓度进入下一步实验。筛选sh-AMPKα1最佳片段,利用RNA干扰技术,沉默MGC-803细胞AMPKα1基因表达,实验分五组(mock组,scramble组,sh-AMPKα1组、sh-AMPKα1+DADS组及DADS组),再检测DADS对沉默AMPKα1后MGC-803细胞的葡萄糖及乳酸浓度,同时观测AMPKα1 m RNA、AMPKα1和LDHA蛋白的表达变化情况。结果:1、DADS抑制胃癌细胞对葡萄糖摄取及乳酸生成比色法显示:不同浓度的DADS(0mg/L、10mg/L、20mg/L、40mg/L)作用MGC-803细胞48h后,葡萄糖浓度逐渐上升,而乳酸浓度逐步下降,且以20mg/L DADS浓度时对葡萄糖摄取及乳酸生成抑制效果最佳(P<0.05)。2、DADS下调胃癌细胞中AMPKα1、LDHA蛋白表达q RT-PCR显示:不同浓度的DADS(0mg/L、10mg/L、20mg/L、40mg/L)作用MGC-803细胞48h后,AMPKα1m RNA表达下调(P<0.05)。Western blot检测示:不同浓度的DADS作用MGC-803细胞48h后,AMPKα1及LDHA蛋白的表达水平下降,以20mg/L DADS浓度AMPKα1及LDHA蛋白表达水平抑制效果最明显。3、AMPKα1是DADS的直接作用靶点沉默AMPKα1后,比色法显示:与sh-AMPKα1组相比,shAMPKα1+DADS组培养细胞上清液葡萄糖浓度、乳酸浓度差异无统计学意义(P>0.05);与mock组相比,DADS组培养细胞上清液葡萄糖浓度上升、乳酸浓度下降,其差异有统计学意义(P<0.05)。q RT-PCR表明:与sh-AMPKα1组相比,sh-AMPKα1+DADS组AMPKα1m RNA差异无统计学意义(P>0.05);与mock组相比,DADS组AMPKα1m RNA表达下调,其差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot检测显示:与sh-AMPKα1组相比,sh-AMPKα1+DADS组AMPKα1和LDHA蛋白表达无明显差异;与mock组相比,sh-AMPKα1组和sh-AMPKα1+DADS组AMPKα1和LDHA蛋白表达明显下调。结论:1.不同浓度的DADS均能抑制胃癌细胞能量代谢,以20mg/LDADS浓度时抑制效果最佳。2.AMPKα1是DADS的直接作用靶点,DADS通过靶向抑制AMPKα1干扰胃癌细胞能量代谢。