环亚酰胺水解酶（cyclic imide hydrolase,CIH,EC.3.5.2.16）)是环酰胺酶中的一个亚类,分子量约35 kDa小于常见的环酰胺酶（52 kDa）,如海因酶或二氢尿嘧啶酶。随着研究的深入,现在已经较明确CIH和海因酶在活性中心,氨基酸序列,底物专一性等方面有着较明显的差异。曾报道菌株Blasterobacter sp.A17p-4中CIH参与二元酸的合成,最终进入类似于TCA循环。CIH不但在药物中间体的制备,异生物质的体内降解中发挥作用,而且也可作为一种生产有机酸的新路线和酶法合成手性化合物的新工具。诚然,目前对其研究报道极少。 我们从一株自行分离的假单孢杆菌（Pseudomonas putida YZ-26）中成功地克隆到以琥珀酰亚胺为最适底物的CIH新基因。序列分析表明,其开放读框（ORF）为879 bp,相当于编码293个氨基酸,分子量约33.7 kDa,基因序列已被GenBank登录（Accession No:DQ093858）。网上同源性分析比对,它和来源于Alcaligenes eatrophus 112R₄的CIH有78%的同源性,而与Blastobacter sp.A17p-4 CIH的N端20个氨基酸有80%的同源性。 将该酶基因引入载体pET-32M,构建成重组质粒pEI。工程菌株pEI/E.coli BL21（DE3）在LB培养基中用0.25 mmol/L IPTG 37℃诱导5 h,获得较理想的可溶性表达产物,目的蛋白的量约占总菌蛋白的10%,上清中的蛋白约占总表达量的40%,酶活力达5.19 U/mL。利用Ni²⁺—NTA agarose亲和柱和Sephacryl—S—200分子排阻层析