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目的:黄芪多糖因其具有抗肿瘤增效、抗炎、保肝等多种活性并具有较高安全性,被广泛应用于医药领域。本文分别以黄芪多糖以及一些多糖为保护剂获得一系列粒径较小、均一且稳定的纳米硒颗粒、纳米银颗粒、纳米金颗粒,对其抗肿瘤活性进行筛选,并采用分子生物学手段对其中高活性纳米颗粒进行抗肿瘤作用机制研究。方法:分别以黄芪多糖、海藻糖、菊糖、麦芽糖醇、D-绵子糖作为保护剂与修饰剂,以抗坏血酸、柠檬酸钠为还原剂合成一系列纳米硒、纳米金、纳米银。采用紫外光谱仪,红外光谱仪,马尔文粒径仪对合成的纳米颗粒进行结构表征。并采用MTT法筛选系列纳米颗粒对乳腺癌、肝癌、肺癌细胞的生长抑制作用,筛选出其中活性最高的纳米颗粒以及对应细胞,应用Annexin V-FITC/PI试剂盒、NAO荧光法、线粒体质量法、ROS法检测纳米颗粒对细胞凋亡的影响,Western blot法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Cleaved casepase 9及自噬相关蛋白LC3、p62、Beclin-1的表达水平。并采用免疫荧光法在形态学方面评估黄芪多糖纳米硒颗粒对乳腺癌细胞的自噬以及凋亡的影响。结果:在分别以5种多糖为保护剂合成的纳米颗粒中,以黄芪多糖为保护剂合成的纳米颗粒具有粒径更小且稳定性更好的特性。MTT法筛选表明,黄芪多糖纳米硒对人肝癌细胞、乳腺癌细胞、肺癌细胞均具有明显的生长抑制作用,对人乳腺癌细胞的活性高于肺癌细胞与肝癌细胞。进一步作用机制研究发现,黄芪多糖纳米硒(AP-SeNPs)能诱导人乳腺癌细胞线粒体质量和线粒体膜电位下降、ROS水平升高。流式细胞术、免疫荧光法与Western blot实验结果显示,AP-SeNPs处理乳腺癌细胞后,细胞凋亡率显著增高,细胞核皱缩并裂解成碎片,Bax、Cleaved caspase 9蛋白的表达量增加,Bcl-2蛋白表达量下降,这表明AP-SeNPs以细胞线粒体介导的内源性通路诱导乳腺癌细胞的凋亡。随后对细胞自噬进行探究,免疫荧光实验检测到胞浆中LC3蛋白的部分红色荧光由弥散状态转变为点状聚集且荧光强度增加;Western blot检测到自噬标志性蛋白LC3-Ⅱ、p62蛋白表达量增加、Beclin-1蛋白的表达量下降;氯喹与AP-SeNPs共同作用于乳腺癌细胞后,LC3-Ⅱ、p62蛋白表达量、细胞凋亡率升高,表明AP-SeNPs能诱导乳腺癌细胞不完全自噬。结论:本文制备出黄芪多糖修饰的纳米金颗粒、纳米银颗粒、纳米硒颗粒,黄芪多糖纳米硒颗粒对人肝癌细胞、乳腺癌细胞、肺癌细胞均具有明显的生长抑制作用,且对人乳腺癌细胞作用更明显,进一步研究发现黄芪多糖纳米硒颗粒能通过诱导不完全自噬、抑制自噬后期进程、诱导凋亡发挥抗肿瘤作用。