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目的:筛选并鉴定出可能会作为免疫相关性全血细胞减少(immuno-related pancytopenia,IRP)患者骨髓造血细胞上的自身抗原。背景:IRP是一种免疫介导的血细胞减少症。前期研究发现IRP发病机制首先是某种原因引起T淋巴细胞调控失衡,Th2细胞比例增多导致B淋巴细胞数量/亚群/功能异常,进而产生抗骨髓未成熟造血细胞自身抗体并破坏或抑制骨髓造血,最后引起的血细胞减少症候群。但是IRP自身抗体所攻击的造血细胞上的靶抗原目前尚不明确,之前本中心利用SDS-PAGE联合免疫印迹法发现了几种靶抗原,包括G蛋白偶联受体(GPCR)156变异体,P链人红细胞带3蛋白,乳铁蛋白及WD重复序列蛋白。自身免疫性疾病的靶抗原往往数个甚至数十个,所以以上方法所验证的抗原仅为极少数,因此本实验采用重组cDNA表达文库的血清学分析法(SEREX)继续寻找IRP自身抗体的靶抗原,并且进一步验证其抗原性。材料与方法:我们构建了K562细胞的噬菌体展示文库,用它替代人骨髓CD34+细胞的蛋白文库。然后用IRP患者和正常健康对照血清对这个文库进行血清免疫学分析。噬菌体表达蛋白的初步挑选是建立在患者与正常健康对照组患者的血清抗体对靶蛋白亲和力差别的基础上,噬菌斑与IRP患者血清孵育,挑选出阳性噬菌斑进行洗脱、扩增、铺板、筛选,若阳性噬菌斑与患者血清呈阳性反应,而与正常血清孵育呈阴性反应,则进行该阳性噬菌斑测序。噬菌体表达蛋白的基因序列确认后,将该噬菌体携带的cDNA片段进行相对应蛋白的表达纯化。我们将FTL,TRMT112,TRAPPC三种基因分别进行基因克隆并且连接入表达载体pEASY-E1,连接成功的重组载体转入宿主菌Ecoli-BL21进行相应蛋白的表达;并对表达的蛋白进行WB验证以及镍柱纯化。最后我们用纯化的蛋白包被ELISA板,用121例IRP患者和15例MDS患者,14例SAA患者以及34名健康对照血清通过间接ELISA方法来检测血清抗FTL抗体的水平以及抗EPOR抗体的水平,并且通过RT-PCR检测了FTL以及EPOR的mRNA表达水平。最后我们对IRP患者的临床指标进行了分析。结果:1.成功构建了cDNA表达文库,文库的库容,代表性以及重组率均符合下一步继续筛选的要求。2.通过免疫印迹的方法初步挑选出了11个阳性噬菌斑,经过提取质粒测序BLAST比对,其中7个有相对应的基因。3.将其中的3个cDNA进行相应蛋白的表达与纯化,并且检测了表达蛋白的正确性。4.初治IRP患者血清中针对FTL以及EPOR蛋白的抗体滴度以及mRNA水平高于IRP恢复组,病例对照组以及正常对照组,初步验证了这两种蛋白的抗原性。初治IRP患者C3水平低于恢复组IRP。结论:(1)本研究成功构建了K562细胞cDNA噬菌体表达文库;(2)成功筛选出7个可能为IRP患者骨髓造血细胞的靶抗原蛋白;(3)间接ELISA方法初步证明FTL蛋白可能具有抗原性,并且进一步证明了EPOR在IRP中的自身抗原角色。