痹肿消汤对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜AnnexinⅠ、AnnexinⅤ表达的影响

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目的:研究痹肿消汤(BiZhongXiao Decoction,BZXD)对胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠滑膜组织膜联蛋白Ⅰ(AnnexinⅠ)、膜联蛋白Ⅴ(Annexin Ⅴ)表达的影响,探讨annexin Ⅰ、annexin Ⅴ在类风湿关节炎(rheumatoid arthrifis,RA)病变过程中的作用及痹肿消汤治疗RA的机理。 方法:采用Ⅱ型胶原(collagen Ⅱ,CⅡ)和完全弗氏佐剂(completedfreund adjuvant,CFA)混合皮下注射诱导实验性大鼠关节炎模型。筛选成功动物模型,随机分为模型组(n=15)、痹肿消汤组(BZXD组)(n=15)。另设正常对照组(n=15)。BZXD组于初次免疫14d后灌服痹肿消汤,生药剂量62.1g/kg·d,2次/d。模型组灌服等体积双蒸水,正常组让其自由饮水。观察大鼠一般情况、体重变化、关节炎指数评分、足爪肿胀度。各组大鼠分别于造模后25d、35d、45d断头处死,进行两种处理:(1)取踝趾关节行HE染色,观察各组滑膜病理形态学变化。(2)分离踝关节滑膜组织。采用免疫印迹法(Westem blot)检测模型组、痹肿消汤组及正常组大鼠在不同时间点滑膜组织中annexinⅠ、annexin Ⅴ的表达,运用Imagetool 3.0灰度扫描软件对结果进行半定量分析,利用spss11.0统计软件包比较组间及组内差异。 结果:1、一般情况观察:模型组大鼠饮食减少,平均体重较正常组和BZXD组减轻(P<0.05),后期可见毛发枯燥等症状;痹肿消汤组、正常组大鼠活泼好动,进食多,毛色光泽柔软。 2、关节炎指数积分评定结果:随着免疫时间延长,模型组与BZXD组关节炎指数增加,于25d达高峰。BZXD组在20d、25d、30d、35d、40d、45d发病程度明显轻于模型组(P<0.05)。 3、模型组大鼠于免疫2周后足爪肿胀较正常组明显(P<0.05)。BZXD组大鼠足爪肿胀度在治疗3周后与模型组相比明显下降(P<0.05)。 4、HE染色病理学检查结果:模型组可见大量血管翳形成,炎性细胞浸润,滑膜增厚等病理特征;痹肿消汤组可见少量新生血管及炎症细胞浸润,滑膜轻度增厚。随时间推移,新生血管减少,炎症逐渐减轻。 5、Western blot结果:模型组大鼠滑膜组织annexin I表达在各时间点明显低于正常组(P<0.01),且在25d、35d和45d水平递减(P<0.05,P<0.01);痹肿消汤组annexin I表达在各时间点明显高于模型组(P0.05)。annexin I表达在25d、35d和45d水平递增(P<0.05,P<0.01)。模型组大鼠annexin V表达在各时间点均低于正常组(P
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