Kisspeptin/NKB在皖西白鹅生殖轴上的表达及其与性腺激素关系研究

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Kisspeptin是2001年发现的一种肽类激素,它是由黑色素瘤转移抑制基因(kiss-1基因)编码的视黄酸家族的神经肽,2003年发现kisspeptin与其受体GPR54在生殖功能调控中具有重大作用。神经激肽B(neurokinin B,NKB)是含十个氨基酸的多肽,属于速激肽家族,近年来,NKB对生殖内分泌的调控作用也越来越受到重视,被认为是除kisspeptin外,在生殖内分泌调控中起重要作用的又一因子。目前国内外关于kisspeptin与NKB在生殖功能调控方面的研究已成为热点,但有关kisspeptin、NKB在禽类尤其是鹅上的研究未见报道。本试验以青春期、产蛋期、就巢期和休产期雌性皖西白鹅为研究对象,采用免疫荧光双标结合激光显微共聚焦技术,检测kisspeptin/NKB在不同生理时期皖西白鹅下丘脑、垂体、卵巢上的定位,并用FV10-ASW3.0软件对其进行半定量荧光强度的测定,分析其在生殖轴时相和空间表达的变化规律。同时结合酶联免疫、放射性免疫等分析方法,运用相关性分析,阐明不同生理时期皖西白鹅外周血清中kisspeptin/NKB含量的变化与性腺激素之间的潜在联系,为进一步研究kisspeptin/NKB在皖西白鹅生殖上的作用及其机制提供一定的科学理论依据。结果显示:(1)Kisspeptin/NKB在不同生理时期雌性皖西白鹅生殖轴上均有不同强度的荧光共表达,且各个时期kisspeptin与NKB的平均荧光强度值差异均不显著(P>0.05)。①下丘脑弓状核、后内侧核:青春期和就巢期的平均荧光强度显著高于产蛋期(P<0.05)和休产期(P<0.05),青春期与就巢期、产蛋期与休产期差异均不显著(P>0.05)。②下丘脑室旁核:青春期和就巢期的平均荧光强度差异不显著(P>0.05),但显著高于产蛋期(P<0.05)和休产期(P<0.05),同时产蛋期时的平均荧光强度也显著高于休产期(P<0.05)。③垂体:不同生理时期腺垂体上均有分布,但神经垂体未见表达。青春期、产蛋期和就巢期腺垂体上的平均荧光强度显著高于休产期(P<0.05),青春期和产蛋期差异不显著(P>0.05),但显著高于就巢期(P<0.05)。④卵巢:不同生理时期卵巢上均存在不同强度的荧光共表达。青春期时仅在卵巢的基质、间质和生殖上皮上发现有kisspeptin/NKB荧光表达,而其余三个时期均在各级卵泡的颗粒层、卵泡膜和间质上发现较强的免疫荧光,以卵泡膜表达量最高,产蛋期时卵巢各部位存在的平均荧光强度均显著高于就巢期(P<0.05)和休产期(P<0.05),且就巢期显著高于休产期(P<0.05);青春期时卵巢间质上存在的kisspeptin/NKB平均荧光强度与产蛋期差异不显著(P>0.05),但显著高于就巢期(P<0.05)和休产期(P<0.05)。(2)不同生理时期雌性皖西白鹅血清中kisspeptin和NKB的含量在休产期显著高于就巢期(P<0.05)、青春期(P<0.05)和产蛋期(P<0.05),就巢期和青春期含量差异不显著(P>0.05),但显著高于产蛋期(P<0.05);孕酮和雌二醇的含量在产蛋期显著高于其余三个时期(P<0.05),就巢期显著高于休产期(P<0.05)和青春期(P<0.05),休产期显著高于青春期(P<0.05)。相关性分析结果显示雌二醇与kisspeptin、NKB的相关系数R分别为-0.835和-0.780;孕酮与kisspeptin、NKB的相关系数R分别是-0.520和-0.531。根据以上结果得出结论:(1)kisspeptin/NKB在青春期和就巢期时皖西白鹅的下丘脑、青春期和产蛋期时皖西白鹅的腺垂体及卵巢上表达最强,而休产期时生殖轴上的kisspeptin/NKB表达最低,提示,kisspeptin和NKB在皖西白鹅不同生理阶段生殖轴上均可能发挥重要的调节作用。(2)不同生理时期雌性皖西白鹅血清中kisspeptin和NKB的平均含量呈现休产期最高,就巢期和青春期次之,产蛋期最低的规律;而孕酮和雌二醇的平均含量则呈现产蛋期高,就巢期和休产期相对较低,青春期最低的规律。(3)血清中雌激素、孕酮水平与kisspeptin和NKB的含量均呈负相关。
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