【摘 要】
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目的探讨不同浓度的莪术油对SW620人结肠癌细胞的增殖、肝转移及其对基因表达的影响,最终证实莪术油能抑制结肠癌细胞增殖,并通过下调OPN基因表达降低结肠癌肝转移的发生。方法体外实验:根据莪术油浓度随机分为8组:400μL/mL莪术油组、200μL/mL莪术油组、100μL/mL莪术油组、50μL/mL莪术油组、25μL/mL莪术油组、12.5μL/mL莪术油组、未添加药物的纯细胞阴性对照组、空白对
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目的探讨不同浓度的莪术油对SW620人结肠癌细胞的增殖、肝转移及其对基因表达的影响,最终证实莪术油能抑制结肠癌细胞增殖,并通过下调OPN基因表达降低结肠癌肝转移的发生。方法体外实验:根据莪术油浓度随机分为8组:400μL/mL莪术油组、200μL/mL莪术油组、100μL/mL莪术油组、50μL/mL莪术油组、25μL/mL莪术油组、12.5μL/mL莪术油组、未添加药物的纯细胞阴性对照组、空白对照组。相应条件处理的结肠癌SW620细胞培养72h后,各组别分用cck-8法检测结肠癌SW620细胞增殖情况。体内实验:采用去脾法构建结肠癌肝转移小鼠模型,选取18只雄性BALB/c裸鼠行脾脏切除术,术中脾被膜下注射O.1mL SW620细胞悬液,术后随机分成三组,分别为:莪术油高浓度组(200μL/mL)、莪术油低浓度组(100μL/mL)和对照组(5%葡萄糖溶液),每组各6只。实验组裸鼠隔天给药一次,给药量200μL/只,对照组予等量5%葡萄糖溶液,连续给药15次后处死。取肝脏组织,每个标本一分为二,一份置于10%福尔马林中备用,一份置于液氮中保存备用。采用HE染色法观察各组结肠癌肝转移病理情况,并采用RT-PCR和Western-blot法检测各标本中OPN mRNA及蛋白的表达水平。结果体外实验:12.5μL/mL莪术油组与阴性对照组比较,OD值无明显差异,(P>0.05),差异无统计学意义。其余各实验组与阴性对照组比较,OD值显著减小(P<0.01),差异均有统计学意义;其中400μL/mL莪术油组及200μL/mL莪术油组与10OμL/mL莪术油组比较,OD值均明显减小(P<0.01),差异均有统计学意义。体内实验:采用去脾法构建裸鼠结肠癌肝转移模型,处死后18只裸鼠肝脏中均可见多个大小不一肿块散在,实验组肿瘤个数明显少于对照组。标本病理切片HE染色表明为结肠癌细胞,提示造模成功。HE染色进一步提示,实验组可明显抑制结肠癌SW620细胞增殖,减少肝转移发生。采用RT-PCR法检测各组OPN mRNA表达量,低剂量组表达较阴性对照组显著减少(p<0.05),高剂量组OPN mRNA表达量较低剂量组进一步减少(p<0.05)。Western-blot法检测到实验组OPN的表达均低于对照组。其中低剂量组(100μL/mL)与对照组比较,OPN的表达较对照组减少(p>0.05),差异无统计学意义:高剂量组(200uL/mL)与对照组比较,OPN的表达显著减少(p<0.05),差异有统计学意义;高剂量组(200μL/mL)与低剂量组(100μL/mL)比较,前者OPN表达低于后者(p>0.05),差异无统计学意义。结论1、莪术油对人结肠癌SW620细胞的增殖具有显著抑制作用。在一定浓度内,其抑制作用与浓度呈正相关,当莪术油浓度为200μL/mL时,对人结肠癌SW620细胞增殖的抑制作用最为明显。2、莪术油能通过下调转移灶中OPN及OPN mRNA的表达,减少结肠癌肝转移的发生。
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