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背景： 慢性低灌注（CCH）可导致脑白质损伤，即缺血性白质脑病，是中老年血管性认知损害主要病理类型之一，因机制不明缺乏有效干预。前期发现腺苷2a受体（A2aR）基因敲除小鼠慢性低灌注模型白质损伤加重，同时慢性低氧细胞模型中A2aR表达下调，均提示A2aR在CCH白质损伤中发挥重要作用，但于在体综合环境中，CCH所致A2aR变化规律尚未明确。预实验显示CCH中A2aR基因启动子区域DNA甲基化模式发生改变，而DNA甲基化主要由甲基转移酶（DNMTs）催化完成。为此提出“CCH引起DNA甲基化关键酶DNMTs表达改变，导致A2aR启动子异常甲基化，致A2aR表达异常，参与脑白质损害”的假说。拟采用慢性低灌注动物模型明确慢性低灌注脑白质损伤区A2aR表达变化规律，并进一步探索脑白质损伤区A2aR基因启动子区域甲基化的变化，以及DNA甲基转移酶表达的改变。拟初步揭示CCH→DNMTs→DNA异常甲基化→腺苷A2aR基因异常表达这一连锁机制，研究结果有助于从DNA甲基化角度揭示慢性低灌注导致脑白质损伤的分子机理，为疾病的防治提供新思路和靶点分子。 方法： 1.采用双侧颈总动脉结扎法（BCCAO）建立大鼠慢性低灌注白质损伤模型，Morris水迷宫实验评估大鼠认知功能，Kluver-Barrera染色观察脑白质区病理变化。 2.动物模型中观察慢性低灌注对受损白质区域A2aR表达的影响：荧光定量PCR检测脑白质区A2aR基因表达水平，Western-Blot方法检测脑白质区A2aR的蛋白表达水平。 3.动物模型中观察慢性低灌注对受损白质区A2aR基因启动子区域甲基化的影响：采用亚硫酸盐测序法（BSP）分析脑白质区A2aR基因的甲基化状态改变。 4.动物模型中观察慢性低灌注对受损白质区DNMTs（DNMT1、DNMT3a和DNMT3b）表达的影响：荧光定量PCR检测脑白质区DNMTs基因表达水平，Western-Blot方法检测脑白质区DNMTs蛋白表达水平。 结果： 一、大鼠慢性低灌注脑白质损伤模型的建立。 1.采用双侧颈总动脉结扎法（BCCAO）建立大鼠慢性低灌注白质损伤模型，建模第2、4、8周时组织病理学染色示：慢性低灌注组大鼠脑胼胝体区域可见神经纤维排列紊乱、稀疏，空泡形成。 2.水迷宫实验显示慢性低灌注大鼠认知功能受损：与假手术组比较，慢性低灌注组到达平台的潜伏时间在术后4周、6周时明显延长（p<0.05，p<0.01），2周时无明显差异；穿越平台次数在术后2周（p<0.001）、4周（p<0.01）、8周（p<0.001）明显减少；在目标象限的时间百分比（p<0.01）、距离百分比（p<0.001）在术后4周时均显著降低；但术后2周、8周时两项指标两组间均无显著差异。 二、慢性低灌注对受损白质区域A2aR表达的影响。 1.qRT-PCR检测不同时间点两组样本中A2AR在胼胝体的转录水平：与假手术组比较，慢性低灌注组的A2AR在2w（p<0.01）、4w（p<0.05）、8w（p<0.05）的转录水平明显减少。 2.WesternBlot检测不同时间点两组样本中A2AR在胼胝体的表达：与假手术组比较，慢性低灌注组的A2AR在2w（p<0.01）、4w（p<0.05）、8w（p<0.01）的表达明显减少。 三、BSP方法分析慢性低灌注对受损白质区域A2aR基因启动子区域甲基化的状态改变。 与假手术组比较，慢性低灌注组平均甲基化水平，在CpG12位点显著增高（p<0.01），显示出高甲基化状态。 四、慢性低灌注对受损白质区域DNMTs表达的影响。 1.qRT-PCR检测不同时间点两组样本中DNMT1、DNMT3a、DNMT3b在胼胝体的转录水平：与假手术组比较，慢性低灌注组的DNMT1在2w、4w的转录水平明显上调（p<0.05），在8w的转录水平明显上调（p<0.01）。与假手术组比较，慢性低灌注组的DNMT3a在2w的转录水平上调，但无显著差异（p>0.05），在4w的转录水平明显上调（p<0.05），在8w的转录水平明显上调（p<0.01）。与假手术组比较，慢性低灌注组的DNMT3b在2w、4w、8w的转录水平明显上调（p<0.01）。 2.WesternBlot检测不同时间点两组样本中DNMT1、DNMT3a、DNMT3b在胼胝体的表达水平：与假手术组比较，慢性低灌注组的DNMT1在2w、4w、8w的表达明显上调（p<0.01）。与假手术组比较，慢性低灌注组的DNMT3a在2w、4w的表达明显上调（p<0.01），在8w的表达明显上调（p<0.05）。与假手术组比较，慢性低灌注组的DNMT3b在2w、4w、8w的表达明显上调，但无显著差异（p>0.05）。 结论： 1.慢性低灌注大鼠出现白质损伤，认知功能损害； 2.慢性低灌注状态下，脑受损白质区域A2aR表达呈下调趋势； 3.慢性低灌注状态下，脑受损白质区域A2aR基因启动子区域呈高甲基化状态； 4.慢性低灌注状态下，脑受损白质区域DNMTs表达呈增强趋势。