引言：胰腺癌仅占全身恶性肿瘤的1%-2%,却成为10种最常见的恶性肿瘤之一,居恶性肿瘤的死亡原因的第4位,须然在医学上对治疗胰腺癌达成一些共识,包括手术治疗的术式,药物的治疗及其他辅助性治疗,但治疗胰腺癌的效果仍然不佳,其病死亡率之高,5年生存率约为5%,被国际医学喻为“21世纪顽固的堡垒”。胰腺癌的发生和发展机制中仍然有许多不解之迷,如能找到其癌的发生机制中的各个靶点,并干扰这些靶点来抑制胰腺癌的发生或发展速度,为治疗胰腺癌提供的理论依据。Mir-146a是22nt非编码RNA,动植物体细胞中均广泛存在,它选择作用于mRNA靶基因,抑制靶基因的转录或降解靶基因。许多研究表明,Mir-146a的表达与乳腺癌、卵巢癌、胰腺癌、口腔癌有明显相关。在Targetscan中发现smad4和timp3是Mir-146a的靶基因,而我科研队伍在行mircroRNA蕊片分析时发现,Mir-146a在胰腺癌细胞中表达比在正常胰腺细胞的要高,这一信号引起我们的关注,而smad4和timp3均在人体的许多器官肿瘤的发生发展中充当重要的角色,这说明smad4和timp3在肿瘤信号通路中起到举足轻重的调控作用。Smad4通常在胰腺癌、结肠癌中的低表达,有学者将其表达修复还原后,观察到smad4主要起到控制肿瘤细胞增殖、侵袭和转移。Timp3在肝癌、小细胞肺癌、乳腺癌等发挥着抑制肿瘤细胞侵袭和凋亡。我们在此研究的基础上,初步验证smad4和timp3是否为Mir-146a的靶基因,并结合临床各病理特征,观察smad4和timp3的表达与临床各病理特征的关系,是否有明显的临床意义。目的：本实验通过验证胰腺癌中的Timp3和Smad4蛋白的表达,并间接验证Timp3和Smad4基因是否Mir-146a|的靶基因,并且通过Timp3及Smad4分子的表达,分析患者的病理特征和预后的相关性,以便拉近胰腺癌的科研工作与临床应用的距离。方法：经我科科研队伍选取14例胰腺导管癌及6例正常胰腺组织标本,送上海生物芯片进行MircroRNA基因分析,发现mir-146a在胰腺癌组织中比正常胰腺高5.6倍。利用Targetscan等基因数据库预测到(?)mad4、TIMP3可能是mir-146a的靶基因,mir-146a通过与Smad4、TIMP3的3’UTR端不完全互补结合,抑制Smad4、Timp3的表达。我们通过运用免疫组化方法,根据0-3级之间来综合描述染色的强度和染色率。0：无染色或阳性细胞<10%,1：>10%的肿瘤细胞阳性或10-40%的肿瘤细胞染色弱阳性,2：>40%肿瘤细胞染色弱阳性或10-40%肿瘤细胞强染色,3：>40%的肿瘤细胞强染色。半定量检测胰腺癌及正常胰腺中Smad4和Timp3分子的表达,间接验证Smad4和Timp3基因是否是Mir-146a的靶基因,并通过增加8例胰腺癌的免疫组化(共22例胰腺癌标本),通过常规的长期随访资料,分析Smad4和Timp3分子的表达与各临床病理特征、预后的相关性,了解各因素对胰腺癌手术预后的影响。全部统计分析数据均运用SPSS13.0进行检验,各分子表达与临床病理参数的检验运用卡方检验分析,理论频数小于5者运用Fisher确切概率法；等级资料采用两个独立样本的Mann-WhitneyU检验；单变量生存分析用Kaplan-Meier法,各亚组之间差异比较运用Log-rank分析；多变量分析运用Cox回归；以a=0.05(双侧)为检验水准,P<0.05为有统计学意义。结果：1、根据14例胰腺癌及6例正常胰腺组织的免疫组化,Smad4和Timp3在正常胰腺组织比胰腺癌表达高(P=0.002, P=0.008), mir-146a的表达与Smad4蛋白分子的表达显著相关(r=-0.741,P<0.001),且呈负相关关系。mir-146a的表达与Timp3蛋白分子的表达相关(r=-0.485,P=0.03),且呈负相关关系。2、Smad4分子的表达与胰腺癌患者的性别(P=0.662)、年龄(P=0.091)、是否吸烟或/和饮酒(P=0.386)、PET的SUVmax值(P=0.07)、肿瘤的大小(P=0.183)无明显关系,而与肿瘤的病理分化程度(U=30.0,P=0.015)、T分期(P=0.024)、N分期(P=0.006)以及临床分期(U=22.5,P=0.012)有显著关系。3、Timp3分子的表达与胰腺癌患者的性别(P=0.666)、年龄(P=0.67)、是否吸烟或/和饮酒(P=0.378)、PET的SUVmax值(P=0.179)、肿瘤的大小(P=0.67)、肿瘤的病理分化程度(U=45.0,P=0.177)、T分期(P=1.000)、N分期(P=0.391)以及临床分期(U=49.0,P=0.403)均无显著关系。4、单因素的生存分析表明：胰腺癌术后患者的生存与性别(χ2=1.744,P=0.187)、年龄(χ2=2.563,P=0.109)、是否吸烟或/和饮酒(χ2=0.077,P=0.781)、Timp3蛋白分子的表达(χ2=1.015,P=0.314)无明显关系。而与PET的SUVmax值(χ2=11.836,P=0.001)、肿瘤的大小(χ2=9.736,P=0.002)、病理分化程度(χ2=5.21, P=0.022)、Smad4蛋白分子的表达(χ2=5.04,P=0.025)、T分期(χ2=5.854,P=0.016)、N分期(χ2=4.43,P=0.035)以及临床分期(χ2=5.854,P=0.016)有显著的关系。5、Cox多因素回归分析发现,胰腺癌的病理分化程度(R=1.063,P=0.016)及肿瘤的大小(R=0.155,P=0.019)是影响预后的独立因素。结论：1、mir-146a的表达与Smad4蛋白分子的表达显著相关,Smad4可能是Mir-146a的靶基因。mir-146a的表达与Timp3蛋白分子的表达相关关系不明显,Timp3可能不是mir-146a(?)的靶基因。2、Smad4分子的表达与胰腺癌患者的病理分化程度、T分期、N分期以及临床分期有显著关系,检测(?)Smad4蛋白在胰腺癌中的表达,可提供判断胰腺癌患者的病理分化程度、T分期、N分期、临床分期以及预后等重要临床指标。3、患者的生存与PET的SUVmax值、肿瘤的大小、病理分化程度、Smad4蛋白的表达、T分期、N分期以及临床分期有关系。且胰腺癌的病理分化程度及肿瘤的大小是影响预后的独立因素。